[发明专利]小花棘豆黄酮的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于畜牧养殖技术领域，涉及一种小花棘豆黄酮的制备方法及应用。 

背景技术

目前，食品的安全问题已经成为人们高度关注的焦点。其中抗生素的长期滥用所带来的药物残留、耐药性及耐药性的垂直和横向传播问题也引起了人们的普遍关注。有鉴于此，饲料安全问题越来越受到人们的重视，世界卫生组织(WHO)已经正式提出抗生素不可用于除人类以外的领域，欧美发达国家在饲料中禁用或限用抗生素，毫无疑问，饲用抗生素被取缔的趋势不可逆转。其替代物的选择已成为动物营养学的研究热点。部分营养活性物质如生物碱、多酚、皂甙、多糖和黄酮等已应用于饲料生产。其中黄酮类化合物是自然界分布广泛的一类次生代谢产物，是药用植物中主要的活性成分之一，在畜牧业生产中的研究应用发现，该化合物能提高饲料转化率，促进动物生长；提高畜禽机体免疫力，具有抗菌消炎、提高抗氧化应激能力和保健等作用。 

小花棘豆(Oxytropis glabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆属(Oxytropis)植物，在新疆分布广泛。据蒙药典记载，小花棘豆具有麻醉、镇静和止痛等作用。黄酮类化合物是小花棘豆的有效成分之一，具有抗菌、抗炎、抗突变、降压、清热解毒、镇静、利尿等作用，在抗氧化及抑制脂肪酶等方面有显著效果。可作为营养活性物质直接参与激发机体抗氧化和免疫反应，也可参与机体营养代谢活动，促进营养物质合成。饲料中添加小花棘豆黄酮可能会起到维持机体正常抗氧化能力的作用，对维持动物机体的正常生理功能，提高生产性能具有重要意义。到目前为止，并未有小花棘豆黄酮应用于动物饲料的专利申请。 

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术存在的缺陷，提供一种小花棘豆黄酮的制备方法及应用，是一种动物饲料添加剂，其含有的小花棘豆黄酮具有提高动物免疫和抗氧化功能的作用。 

其具体技术方案为： 

小花棘豆黄酮的制备方法，包括以下步骤： 

(1)小花棘豆黄酮的分离：取小花棘豆地上部分，阴干、粉碎、过20目筛后备用。采用超临界CO₂提取法，称取适量小花棘豆粉末和2倍质量的硅藻土，装柱，两端用适量的脱 脂棉以防止柱子堵塞，扭紧提取池，以防止气体泄露，将提取池放于加热恒温箱中接通整个提取管道，保证整个提取系统不存在漏气。设定温度、压力、夹带剂流速、CO₂流速等参数，参数稳定后进行提取。提取液经旋转蒸发仪浓缩，冷冻干燥仪干燥，得到棕黄色粉末。 

(2)超临界CO₂提取法的优化：设置提取温度范围为30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃和65℃；提取压力范围为10MPa、15MPa、20MPa、25MPa和30MPa；设置提取时间范围为0.5h、1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h、3.5h、4.0h、4.5h和5.0h；设置夹带剂浓度为10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％和100％；设置夹带剂流速为0.1mL/min、0.2mL/min、0.3mL/min、0.4mL/min和0.5mL/min；设置CO₂流速为0.5mL/min、1.0mL/min、1.5mL/min、2.0mL/min和2.5mL/min。根据Central Composite中心组合试验设计原理，整个试验过程以小花棘豆黄酮提取率为响应值，得到最佳提取工艺为：提取温度45℃，提取压力20MPa，提取时间2.0h，夹带剂为乙醇，夹带剂浓度80％，夹带剂流速0.4mL/min，CO₂流速1.5mL/min。 

(3)小花棘豆黄酮含量的测定：采用HPLC法。色谱柱为C₁₈(2.1*150mm，1.8μm)，流动相为乙腈和水，柱温30℃，流速1.0mL/min，检测波长为360nm，检测标准品槲皮素，进样量1μL。采用梯度洗脱：0min，乙腈∶水＝10％∶90％；1min，乙腈∶水＝10％∶90％；3min，乙腈∶水＝20％∶80％；6min，乙腈∶水＝45％∶55％；8min，乙腈∶水＝75％∶25％。结果表明小花棘豆黄酮提取率为18.84mg/g。