[发明专利]一种茄子花药培养获得单倍体再生植株的方法

说明书

技术领域：

本发明属农业领域，具体涉及一种茄子花药培养获得单倍体再生植株的方法。

技术背景：

花药培养，是适宜条件下离体花药培养成单倍体植株的组织培养技术，是单细胞水平上获得纯系的有效方法，是重要的育种辅助手段。茄子是重要茄科蔬菜作物之一，发展茄子生产，寻求具有抗性、优质、高产等优良性状的品种具有重要理论和实践意义。茄子杂交优势十分显著，在品种改良上发挥了重要作用；而未被利用的茄子种质材料日益减少，种质资源匮乏，且常规育种手段时间长、工作量大、效率低；应用花药培养技术获得单倍体植株，可克服杂种性状的分离，短时间固定和分析杂种植株的新遗传组合；经染色体加倍后，得到基因位点纯合的新品系，精确、快速创造新种质。常规育种获得遗传稳定自交系一般需要5～8年，而花药培养只需1～2年，省去多代自交的繁琐过程，且避免了优质基因的丢失；花药培养用于茄子育种实践中，大大缩短育种周期，开辟了一条新品种选育的新途径。

茄子花药培养有诸多优点，但由于花粉发育时期选择、花药培养组织褐化、愈伤组织诱导及分化频率低等因素，诱导率极低，重复性操作不强，目前仍未能应用于茄子育种。

发明内容：

本发明目的在于针对背景技术提出的茄子花药培养效率低问题，提供一种茄子花药培养方法，获得单倍体再生植株。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种茄子花药培养获得单倍体再生植株的方法，包括以下步骤：

⑴取花粉发育处于单核中后期的花药；

⑵接种至预处理培养基上，预处理；

⑶将预处理后的花药，在24℃～28℃条件下暗培养6～7d至花药顶端出现黄白色组织后，转接至愈伤组织诱导培养基，在昼温25±1℃/夜温22±1℃、光照2000～3000LX、光周期14h·d^-1条件下培养12～16天后，转接至增殖培养基上继续培养至愈伤组织直径为0.4～0.6cm；

⑷将直径为0.4～0.6cm的愈伤组织转接至1/2B₅分化培养基，在昼温25±1℃/夜温22±1℃、光照3000～4000LX、光周期16h·d^-1条件下分化培养至愈伤组织直径为1～2cm，然后转接至B₅分化培养基继续培育获得再生植株；

⑸移栽。

所述的预处理培养基为MS+0.1mg·L^-1～0.2mg·L^-12,4-D+0.5mg·L^-1～1.0mg·L^-1KT+2％～3％蔗糖+0.6％～0.8％琼脂，pH5.8～6。

所述预处理的过程为：置于4℃暗处理45～50h；后移至36℃处理120～150h。

所述的愈伤组织诱导培养基为MS+0.2mg·L^-1～0.25mg·L^-12,4-D+1.0mg·L^-1～2.0mg·L^-1KT+2％～3％蔗糖+0.6％～0.8％琼脂，pH5.8～6；所述的增殖培养基为MS+0.1mg·L^-1～0.25mg·L^-12,4-D+2.0mg·L^-1～3.0mg·L^-1KT+2％～3％蔗糖+0.6％～0.8％琼脂，pH5.8～6。

所述的1/2B₅分化培养基为1/2B₅+0.01mg·L^-1～0.02mg·L^-1NAA+4.0mg·L^-1～6.0mg·L^-1KT+1.0mg·L^-1～5.0mg·L^-1VC(维生素C)+2％～3％蔗糖+0.6％～0.8％琼脂，pH5.8～6；所述的B₅分化培养基为B₅+0.01mg·L^-1～0.02mg·L^-1NAA+6.0mg·L^-1～8.0mg·L^-1KT+5.0mg·L^-1～10.0mg·L^-1VC+2％～3％蔗糖+0.6％～0.8％琼脂，pH5.8～6。

本发明所述培养基中蔗糖和琼脂的浓度单位为质量百分比。