[发明专利]一种基于实验仔兔的空肠弯曲菌致腹泻模型

说明书

技术领域

本发明涉及细菌致病模型，特别是空肠弯曲菌致实验仔兔的腹泻模型。

背景技术

空肠弯曲菌是人类肠胃炎的最主要的致病菌，临床约90％的急性细菌肠炎均与该菌相关。在欧美等国，其致病率已超过沙门氏菌、志贺氏菌、0157大肠杆菌等。除了引起肠炎之外,空肠弯曲菌还是吉兰-巴雷综合征(GBS)的主要诱因之一，鉴于它极高的感染率以及后续的潜在威胁，已受到人们的密切关注。

空肠弯曲菌感染后，临床表现复杂多样，但主要症状为腹泻性肠炎，同时也有无症状携带和极少数因菌血症而引起的肠道外感染。动物模型是研究空肠弯曲菌的致病机理、与宿主间的相互作用及研发疫苗的基础，研究者尝试了多种动物的空肠弯曲菌感染试验，主要包括灵长类动物、雪貂、猪、兔、啮齿类动物和鸡，综合考虑其疾病相似性、重复性及经济性，仍没有建立起良好的空肠弯曲菌感染实验动物模型，给致病机制、保护性抗原研究以及疫苗效力检验等造成困难。

以初生实验仔兔构建动物模型，其主要优势如下：首先，比起啮齿类动物，兔在心血管系统、消化系统、皮肤系统、骨骼发育、营养代谢等方面与人类具有较大的相似性，利用兔构建动物模型，可以在很大程度上模拟人感染空肠弯曲菌引发肠胃炎病发的整个过程；其次初生仔兔没有受过外界细菌的感染，对许多病毒和致病菌非常敏感，适用于各种微生物学的研究，应用初生仔兔已成功建立大肠杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等肠道致病菌感染模型；再者，仔兔体型小、遗传背景清晰，这样既方便实验操作，又可保证个体间在基因型方面的均一性，以便于后期基因表达的研究。

发明内容

本发明目的在于为人们提供一种基于实验仔兔的空肠弯曲菌致腹泻模型。

一种基于实验仔兔的空肠弯曲菌致腹泻模型，是空肠弯曲菌人工感染仔兔并引起自限性的、水样腹泻症状。通过剖检发现主要病变是小肠积液、肠壁出现出血点，盲肠、结肠肿大，肠腔内充满水样内容物；组织病理切片显示盲肠黏膜出现坏死脱落，固有层小血管扩张、充血。

通过剂量反应实验显示腹泻疾病的程度与攻毒剂量、肠道细菌定植量正相关，至少10⁶CFU细菌可引起仔兔可观察的腹泻症状和各肠道的定植；至少10⁴CFU细菌可引起盲肠和结肠的定植。

通过不同来源空肠弯曲菌分离株对实验仔兔致病性存在明显差异，说明该模型能够有效评价不同分离株的毒力强弱。

通过细菌分离，显示空肠弯曲菌侵入血液的速度很快，对肝脏、肾脏等实质器官的黏附性无明显差异，并在48hr后被清除；在盲肠和结肠中定植时间大于60hr，定植量高达10⁸CFU/g。

通过扫描和透射电子显微镜结果显示空肠弯曲菌可黏附在肠绒毛，并在攻毒后24～36hr侵袭破坏部分上皮细胞；48～60hr可见部分上皮细胞脱落、凋亡，大量上皮内淋巴细胞浸润。

通过Real-time RT-PCR结果显示感染后12hr可见IL-10和抗菌肽CAP-18的大量分泌，36hr时IL-18、CCL20分泌增加；60hr时IFN-γ、IL-10、IL-8、iNOS发挥重要免疫作用。

本发明公开了一种空肠弯曲菌感染实验仔兔致腹泻动物模型，腹泻症状和病理变化等与人类感染表现相似，仔兔腹泻疾病的程度与攻毒剂量、肠道细菌定植量正相关，仔兔模型能有效评价空肠弯曲菌的毒力强弱，进一步分析显示空肠弯曲菌进入血液引起菌血症，但菌血症最终病情转归，在兔盲肠和结肠中定植率最高，24hr为定植最高峰，空肠弯曲菌可侵袭细胞引起肠上皮细胞凋亡，兔上皮内淋巴细胞的数量增加，多种细胞因子发挥了免疫调节作用。

本发明首次建立了空肠弯曲菌感染实验仔兔致腹泻的动物模型，该感染模型临床症状和病理变化明显，能够正确反应菌株的毒力，且模型动物体型小，易于操作，适合用作空肠弯曲菌的研究模型。

附图说明

图1空肠弯曲菌感染兔临床病理学变化。a:对照组.b:实验组腹泻。

图2空肠弯曲菌感染兔解剖病理学变化。A：心包炎；B：脾脏略显肿大；C：腹腔积液，小肠肿胀，积液；D：盲肠充满内容物，结肠肠壁菲薄；E：小肠内壁有出血点。

图3感染兔盲肠组织HE染色。A：盲肠局部肠粘膜出现坏死脱落200×；B：固有层小血管扩张，充血200×。

图4感染仔兔空肠弯曲菌分离株菌落形态(A)、革兰染色(B)及多重PCR(C)。