[发明专利]一种胶原蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种胶原蛋白的制备方法，其特征是具有如下步骤：

①动物尾腱的准备

取动物尾，并对动物尾进行灭菌处理后，手术剥离筋腱，并收集筋腱； 

②胶原蛋白的提取

使用含尿素溶液将步骤①中得到的筋腱浸没，在溶液中将筋腱破碎，将已破碎的尾腱尿素混合液在2-25℃提取；

③胶原蛋白的纯化

       将步骤②得到的混合溶液进行过滤处理，去除未溶解的杂质后获得粗提液，对粗提液进行凝胶分离，根据紫外吸收选取合适体积段的溶液进行收集；

④精制

       将步骤③收集的粗提液进行去除盐和去杂质处理后得到精制液，精制液中含盐量低于0.1%；

⑤冻干

       取步骤④得到的精制液用冻干机冻干，得到医用级胶原蛋白。

2.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤①中的灭菌方法为采用70%酒精擦拭。

3.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤①中手术剥离筋腱的方法为：将灭菌后的动物尾放入磷酸盐缓冲液中保存，在磷酸盐缓冲液中用手术刀去除外表皮，然后将动物尾中白色筋腱剥离抽出，避免带出骨渣和碎肉，将动物尾腱放入磷酸盐缓冲液中清洗直至滤液无血迹为止，用漏斗过滤，收集筋腱。

4.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤②中将动物尾腱与含尿素溶液进行混合时可以采用摇床进行混匀，摇床转速50-320rpm；或者采用磁力搅拌器混匀，磁力搅拌器的转速100-1200rpm。

5.如权利要求1或4所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：所述的含尿素溶液中含1-10mol/L的尿素和0-1mol/L的无机盐。

6.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤③中所述的过滤处理为：取步骤②得到的混合溶液的上层清液过0.22-10μm醋酸纤维膜，获得粗提液，然后使用蛋白质纯化系统或蠕动泵对粗提液进行凝胶分离，根据滤液紫外吸收选取UV280>0.01部分体积段的溶液进行收集，分离体积：有效柱容积为1:10-1:100。

7.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤④中所述的精制方法为：采用透析法，透析袋材质为醋酸纤维，孔径为10K道尔顿，经过若干次透析脱盐至含盐量低于0.1%后，即得到精制的胶原蛋白溶液。

8.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤④中所述的精制方法为：采用超滤法，滤膜采用管式抗污染膜，孔径为10K道尔顿，经过5-20倍连续洗滤，获得高纯度溶液至含盐量低于0.1%后，即得到精制的胶原蛋白溶液。

9.如权利要求1所述的胶原蛋白的制备方法，其特征是：步骤⑤中冻干的时间为48-72h。