[发明专利]一种培育抗蚜虫的转基因小麦的方法

权利要求书

1.一种培育抗蚜虫的转基因小麦的方法，其特征在于，该方法是将含有掌叶半夏凝集素基因的重组表达载体导入目的小麦中，得到抗蚜的转基因小麦，所述转基因小麦对蚜虫的抗性高于目的小麦。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述掌叶半夏凝集素基因是PPA基因，其序列被专利保护，申请号为200910073815.1，用PCR扩增PPA基因时，为了增强其转化后在小麦中的表达量，在设计引物的时候加入KOZAK序列GTCGCCACC，所述重组表达载体的出发质粒是pCambia1380。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述重组表达载体的构建方法如下：

用EcoR I和BamH I酶切35S-T载体，得到含有35S基因的片段；用BamH I和HindⅢ酶切KPPA-T载体，得到含有KPPA基因的片段；用HindⅢ和BgⅡ酶切GUS-T载体，得到含有GUS基因的片段；将这些片段依次插入到载体pCambia1380的多克隆位点中，得到所述重组表达载体命名为pCambia1380-SKPG。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体35S-T载体是将35S基因连接pGEM-T Easy vector得到，用PCR扩增pCambia1380的35S启动子，所用的引物为

5’-CCGAATTCCCCAACATGGTGGAGC-3’

5’-CGGGATCCGCGAAAGCTCGAGAGAG-3’，

扩增出的35S启动子长度为0.8kb。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述KPPA-T载体是将KPPA基因连接pGEM-T Easy vector得到，用PCR扩增KPPA基因时，所用的引物为

5’-CGGGATCCGTCGCCACCATGGCCTCCAAGCTC-3’

5’-CCCAAGCTTCGCGGCAATTGG-3’，

扩增出的KPPA长度为0.8kb。

6.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述载体GUS-T是将GUS基因连接pGEM-T Easy vector得到，用PCR扩增PTCK303的GUS基因时，所用的引物为

5’-CCCAAGCTTATGTTACGTCCTGTAGAAACC-3’

5’-GAAGATCTTCATTGTTTGCCTCCCTG-3’，

扩增出的GUS长度为2.0kb。

7.如上述任一权利要求所述的方法，其特征在于，所述目的小麦为石4185。