[发明专利]一种动物双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物双歧杆菌细菌素及其生产方法与专用生产菌株，属于食品生物技术领域。

背景技术

乳酸菌及其活性代谢产物与人类健康密切相关，常常自然存在于食品或被有意识地引进食品产品中，从而使食品拥有人们渴望的风味、营养及安全性。乳酸菌活性代谢产物主要涉及乳酸、细菌素、胞外多糖、共轭亚油酸等。乳酸菌细菌素是乳酸菌在代谢过程中通过核糖体机制合成并分泌到环境中的一类具有抑菌活性的多肽或蛋白类物质，它在人体内可被降解，具有高效、无抗药性、无毒、无残留等优点，已成为天然食品生物防腐剂研究与开发的热点。

几乎每个乳酸菌属菌株都可以产生细菌素，目前已报道的乳酸菌细菌素已有40余种。双歧杆菌(Bifidobacterium spp.)是寄生在人和动物肠道内的典型有益乳酸菌，它可以对宿主发挥生物屏障、营养、免疫、延缓衰老、抗肿瘤等生理作用。业已发现，极少数双歧杆菌属菌株也可产生细菌素，如两歧双歧杆菌(B.bifidum)NCFB1454、嗜热双歧杆菌(B.thermophilum)RBL67、婴儿双歧杆菌(B.infants)BCRC14602等。

双歧杆菌是人体肠道健康的重要指标，在食品工业中也占有重要地位，其所产细菌素也越来越受到人们的重视，必将成为天然生物防腐剂的开发热点。

发明内容

本发明的目的是提供一株具有广谱抑菌效果的产细菌素双歧杆菌。

本发明所提供的双歧杆菌，是动物双歧杆菌(Bifidobacterium animals)BB04，已于2013年06月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为：CGMCC №.7790。

本发明的第二个目的是提供一种双歧杆菌细菌素及其生产方法。

本发明所提供的生产双歧杆菌细菌素的方法，是发酵动物双歧杆菌(Bifidobacterium animals)BB04 CGMCC №.7790得到的细菌素。

所述方法中，用于培养动物双歧杆菌(Bifidobacterium animals)BB04 CGMCC №.7790的培养时间优选为40.4h，培养基起始pH值优选为6.94，培养温度优选为34.5℃。

所述方法中，得到的细菌素可按照以下步骤进行提取纯化：采用pH吸附解吸法从发酵液中提取细菌素，吸附pH值为2.0-3.0，解吸pH值为5.0-7.0，得到细菌素粗品；进一步通过阳离子交换树脂层析及凝胶过滤层析纯化，并经冷冻干燥得到细菌素纯品。

其中，上述pH吸附解吸法的最佳吸附pH值为3.0，最佳解吸pH值为6.0。

上述阳离子交换树脂层析以SP Sepharose Fast Flow为填料，用pH5.5，含0-1M NaCl的0.02M醋酸缓冲液在130min内进行线性梯度洗脱，流速1.0mL/min，收集保留时间为40-48min的蛋白峰为细菌素活性峰。

上述凝胶过滤层析以Sephadex G-10为填料，用pH6.0，0.02mol/L磷酸缓冲液进行洗脱，流速0.5mL/min，收集保留时间为34-48min的蛋白峰为细菌素活性峰。

上述提取纯化所得细菌素分子量为1198.6832Da。

上述方法得到的双歧杆菌细菌素也属于本发明的保护范围。

本发明的动物双歧杆菌(Bifidobacterium animals)BB04 CGMCC №.7790是一种产细菌素的动物双歧杆菌，该细菌素是一种新型双歧杆菌细菌素，其具有非常良好的食品加工特性，抑菌谱广，安全性高，可用于天然食品生物防腐剂或微生态制剂的开发。

附图说明

图1为不同pH值条件下细菌素对产生菌细胞的吸附率图。

图2为细菌素的阳离子交换树脂层析洗脱曲线图。

图3为细菌素的凝胶过滤层析洗脱曲线图。

图4为细菌素的MALDI-TOF MS(基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱)分析图。

具体实施方式

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。应理解，这些实施仅用于说明本发明而不仅限于本发明。

实施例1、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animals)BB04 CGMCC №.7790的分离和鉴定

1、菌株的筛选