[发明专利]泥螺多肽在抗前列腺癌中的应用

权利要求书

1.一种泥螺多肽在制备抗前列腺癌DU-145细胞药物中的应用，

其特征在于所述泥螺多肽通过以下步骤制得：新鲜泥螺洗净去壳，取泥螺组织捣碎，加入蒸馏水匀浆，料液比为1:(3～4)，匀浆后调节匀浆液的pH值为8～9，加入0.4～0.5％匀浆液质量的胰蛋白酶，40～50℃保温水解7～9h，水解完成后95～100℃、10～15min进行灭酶，4℃下水解液于9500～10000r/min离心15～20min，取上清液浓缩干燥得酶解粗提物，将酶解粗提物溶于蒸馏水，经超滤、凝胶层析及反相高效液相色谱分离纯化得各泥螺多肽组分，

所述超滤步骤中使用10kd、5kd及3kd超滤膜，分别获得分子量为10～5kd的组分A1，分子量为5～3kd的组分A2以及分子量小于3kd的组分A3，20～25mg/ml组分A3作用于DU-145细胞36h后的增殖抑制率为77～78％，且增殖抑制指数与组分A3的浓度呈正相关，

所述凝胶层析中对组分A3进行洗脱，分别获得H1组分、H2组分和H3组分，其中5～20mg/ml组分H2作用于DU-145细胞24h后的增殖抑制指数为为44.1～81.6％，且增殖抑制指数与组分H2的浓度呈正相关；

凝胶层析条件：选用Sephadex G-25凝胶层析，装柱后用去离子水平衡，浓度为50mg/mL、上样量为4mL、速度为3ml/min，流动相为超纯水，280nm紫外检测，

采用反相高效液相色谱分离所述H2组分，分离获得组分F1和F2，其中2.5～3mg/ml组分F1和组分F2作用于DU-145细胞24h后，对DU-145细胞的增殖抑制率分别为31～33.72％和40～42.04％，所述组分F1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所述，组分F2的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所述；

反相高效液相色谱条件：选用Zorbax SB-C18(4.6×250，5um)；柱温为20℃；流动相为1％TFA和乙腈；梯度洗脱：从开始到30min结束，乙腈浓度从0变化到40％，洗脱速度为1.0mL/min；进样体积为50ul；紫外检测波长分别为214nm、280nm。

2.如权利要求1所述的泥螺多肽在制备抗前列腺癌DU-145细胞药物中的应用，其特征在于：所述酶解粗提物的浓度在5～25mg/ml时，对DU-145细胞增殖抑制指数为36.9～80.7％，且增殖抑制指数与酶解粗提物的浓度呈正相关。