[发明专利]绿盲蝽唾液蛋白PG12的应用

权利要求书

1.绿盲蝽唾液蛋白PG12在降解果胶中的应用，PG12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.绿盲蝽唾液蛋白PG12在降解植物细胞壁中的应用，PG12蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，绿盲蝽唾液蛋白PG12的制备方法包括以下步骤：

1)绿盲蝽唾液蛋白PG12基因的克隆：分离绿盲蝽唾液腺，提取总RNA，反转录获得cDNA第一链，以cDNA第一链为模板，设计引物进行PCR扩增，扩增产物大小为1056bp；回收PCR扩增产物连接到pMD-TEasy载体上，构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α，提取酶切鉴定正确的阳性克隆的质粒进行测序；

2)重组表达载体的构建：将PCR扩增产物插入pPICZαB载体的EcoRI位点，获得重组表达载体pPICZαB-PG12-His；

3)酵母转化及PG12的诱导表达：将pPICZαB-PG12-His转化入毕赤酵母X-33中，挑取单克隆进行培养，培养过程中加入甲醇诱导表达PG12蛋白，培养结束后，离心收集上清，用带His标签蛋白纯化柱进行PG12蛋白的纯化。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤1)中所述引物为：

F：5′-GAAGCTGCAGGAATTGCCGATATCAATAACCTGGA-3′；

R：5′-CGGCTGGGCCACGTGACAGTCAACTTTGAGCCCGT-3′。

5.绿盲蝽唾液蛋白PG12或其编码基因在植物抗绿盲蝽唾液腺鉴定技术中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述植物包括但不限于棉花。