[发明专利]一种植物组培苗基因组DNA提取的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体来说涉及草本植物基因组DNA快速提取并检测的方法。

背景技术

基因组DNA作为遗传信息的载体和最基本的遗传物质，在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作用，是分子生物学和基因工程的主要研究对象。基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。无论是研究植物DNA的结构和功能，还是开展外源DNA的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量的DNA。不同植物的基因组DNA提取方法有所不同；不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及成分不同，分离方法也有差异。

植物基因组DNA提取的方法有很多，其过程大多较为繁琐，且耗时耗力。冗长的提取过程不仅增加了基因组DNA被污染的可能，影响了其纯度，还可能降低了活性，丧失其天然特性。迄今为止，还没有形成快速、简便的植物基因组DNA提取的技术方法。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明目的在于克服了上述之不足，提供一种植物组培苗基因组DNA提取的方法，快速、简便并且有效地保护了植物基因组的活性。具体来说，本发明提供的技术方案如下：

一种植物组培苗基因组DNA提取的方法，包括如下步骤：

（1）取一定量的植物组培苗的叶片组织，处理后放入离心管中；

（2）按每克上述植物组织0.5～10ml的比例向上述离心管中加入温水预热后的SDS与CTAB混合抽提液，混摇1～100min；

（3）用移液枪的枪头伸入上述离心管底部，缓慢同向旋转挑取丝状粘稠物质，即所得基因组DNA；

（4）将上述基因组DNA溶于适量水中；

（5）取步骤（4）的溶液适量，采用1～10%琼脂糖进行电泳检测。

优选地，所述步骤（1）的植物组培苗叶片组织是新鲜的或-20℃环境下保存的植物组培苗叶片组织，更优选是新鲜的植物组培苗叶片组织。

优选地，所述步骤（2）的“温水预热”是指在30～100℃的水温下预热1～100min。更优选，所述步骤（2）的“温水预热”是指在60～70℃的水温下预热30～40min。

优选地，所述步骤（2）的SDS与CTAB混合抽提液中SDS与CTAB的体积配比为1～10：1，更优选为2：1或3：1或4：1。

优选地，所述步骤（5）琼脂糖凝胶电泳法检测中所采用的琼脂糖的浓度更优选是1～3%。

本发明的有益效果是：具有操作简单，过程便捷、可操作性强、耗材节约、快速有效等优点，对实验条件要求不高，对实验人员进行简单培训即可入手，大大缩短植物组培苗基因组DNA提取时间，简化实验过程，有效的保护了基因组DNA的天然活性。此外，这一技术的推广可以运用至其他植物的基因组DNA的提取。

附图说明

图1是作为本发明方法的一个实施例的半夏基因组提取检测结果的照片。

图2是作为本发明方法的另一个实施例的白芨基因组提取检测结果的照片。

具体实施方式

本发明针对现有技术中存在的问题开发了一种快速提取植物组培苗基因组DNA的方法。

以一定量的组织为例，以下示出一种示例性方法：

（1）取0.1～1.0g植物组培苗的叶片组织，处理后放入商用EP管（规格1.5mL或2mL）中；

（2）上述EP管加入温水预热后的SDS与CTAB混合抽提液500～1000μL，混摇1～100min；

（3）用移液枪的枪头（规格200μL或1000μL）伸入上述EP管底部，缓慢同向旋转挑取丝状粘稠物质，即所得基因组DNA；

（4）将上述基因组DNA溶于50～100μL纯水中；

（5）取步骤（4）后溶液适量，进行1～10%琼脂糖电泳检测。

本发明的方法操作简单，过程便捷、可操作性强、耗材节约、快速有效，对实验条件要求不高，对实验人员进行简单培训即可入手，大大缩短植物组培苗基因组DNA提取时间，简化实验过程，有效的保护了基因组DNA的天然活性。

步骤（1）中的材料可以是新鲜的或-20℃环境下保存的植物组培苗叶片组织中的任一种，优选为新鲜的植物组培苗叶片组织。

步骤（2）中的“温水”是指30～100℃的水温，优选60～70℃；而步骤（2）中的“预热”时间为1～100min，优选30～40min。