[发明专利]六倍体藏红花种质资源的创制方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种生物技术，具体是一种六倍体藏红花种质资源的创制方法。

背景技术

藏红花又名西红花、番红花，属名贵紧缺中药材，因含有藏红花素而备受关注，被誉为世界上最贵的药用植物、世界上最好的染料、世界上最高档的香料。国家中医药管理局列为重点发展的中药材品种。近年来藏红花在医疗、保健、化工等方面的价值被全面开发，由于用量巨大，市场供不应求，主要依赖进口。藏红花为三倍体，不结实，所以采用无性繁殖，“种球”在繁殖过程中很容易感染植物病毒，一经染毒很难去除而且会越来越严重，极大降低了藏红花的产量和质量。经对现有技术的检索发现，藏红花脱毒后增产效果明显。可是，像其它单子叶植物一样，藏红花没有普通意义上的茎，叶片与球茎直接相连，生长点位于叶与球茎的交叉处。由于叶与球茎的交叉的面积比较大，所以在显微镜下寻找并剥离生长点如“大海捞针”般困难；另外无菌苗诱导出来的微型球根生长缓慢，不能快速繁殖。所以藏红花脱毒研究至今尚未取得实质性进展。

发明内容

本发明的目的，就是为了解决上述问题，提供一种六倍体藏红花种质资源的创制方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种六倍体藏红花种质资源的创制方法，包括如下步骤：

步骤一，将藏红花球根表面消毒后接种到MS空培养基中，得到无菌苗；

步骤二，无菌苗生长40-60天后，取其下部球根上的顶芽和侧芽进行超声处理；

步骤三，将超声处理后的材料在0.5-1.0％的秋水仙溶液素中浸泡10-20分钟；

步骤四，将秋水仙素溶液浸泡过的材料进行离心操作；

步骤五，将离心后的材料转入出芽诱导培养基中培养30-40天；

步骤六，从步骤五中所得丛生芽上切取生长点进行压片镜检；

步骤七，将镜检初步筛选为六倍体的幼芽用流式细胞仪进一步检测筛选，最终得到纯合的藏红花六倍体植物材料。

本发明所得六倍体藏红花材料可以用来诱导藏红花的开花结实，从而得到无病毒种源，生产上有巨大的应用价值。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，该实施例以本发明中的技术方案为前提，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

本实施例的藏红花球形根来自上海交通大学。

实施例的步骤如下：

1.将藏红花球根表面消毒后接种到MS空培养基中，得到无菌苗；

2.无菌苗生长60天后，取其下部球根上的顶芽和侧芽，超声(80w)处理10分钟；

3.超声处理后的材料在0.5-1.0％的秋水仙溶液素中浸泡20分钟；

4.秋水仙素溶液浸泡过的材料5000转/分钟的条件下离心5分钟；

5.将离心后的植物材料转入出芽诱导培养基基中，配方为：MS+6-BA0.2-1.0mg·L^-1+TDZ0.1-1.0mg·L^-1；

6.培养40天后出现了丛生芽，将新生芽生长点进行压片镜检后发现六倍体的材料；

7.将镜检初步筛选为六倍体的幼芽用流式细胞仪进一步检测，最终得到纯合的藏红花六倍体植物材料。

本实施例中，共获得了4棵六倍体藏红花植株，正在进行开花结实试验。