[发明专利]南美白对虾LvDJ‑1蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及南美白对虾LvDJ-1蛋白以及编码该蛋白的基因，包含该基因的载体以及该蛋白的应用。

背景技术

1997年Nagakubo等运用酵母双杂交技术筛选出与c-myc相互作用的一种新的蛋白，第一次发现DJ-1，是帕金森病（Parkinson s disease,PD）较常见的致病基因，以不对称的二聚体形式参与细胞的多种生命活动，如神经损伤、肿瘤发生、转录调控、分子伴侣、免疫、以及抗氧化等。DJ-1蛋白的单体是由11个折叠和8个螺旋组成。其中β3和β4折叠形成1个β发夹结构参与了DJ-1蛋白的二聚化。DJ-1参与各项生命活动的具体机制尚不清楚，通过镉应激、亚硝酸盐应激，溶藻弧菌应激已经干扰LvDJ-1的南美白对虾，初步验证其与抗镉离子、抗亚硝酸盐、抗溶藻弧菌有密切的相关性。

南美白对虾（Litopenaeus vannamei），又名凡纳滨对虾，属节肢动物门（Arthropoda）、甲壳纲（Crustacea）、十足目（Decapoda）、游泳亚目（Natantia）、对虾科（Penaeidae）、对虾属（Penaeus）、Lito-penaeus亚属，是广温广盐性热带虾类。南美白对虾是当今世界养殖产量最高的三大虾类之一。南美白对虾原产于南美洲太平洋沿岸海域。南美白对虾具有生长速度快、适应能力强、产量高等优点,已成为我国最主要的养殖品种之一。但是，由于面对着目前的急剧的气候变化灾害和严重污染的水质问题，从而导致了其致病率和死亡率居高不下，对南美白对虾的人工养殖造成严重的经济打击，也是一个难以解决的问题。如何增强南美白对虾的抗逆能力，提高养殖存活率，是目前亟待解决的难题。

发明内容

针对现有问题，本发明的目的在于提供一种南美白对虾LvDJ-1蛋白、该蛋白的编码基因、以及该蛋白的应用。

本发明所采取的技术方案是：

南美白对虾LvDJ-1蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者是SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸和/或末端修饰且具有同等或更高活性的蛋白。

编码上述南美白对虾LvDJ-1蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

一种克隆载体，其含有南美白对虾LvDJ-1蛋白基因。

一种表达载体，其含有南美白对虾LvDJ-1蛋白基因。

生产南美白对虾LvDJ-1蛋白的方法，包括将含有南美白对虾LvDJ-1蛋白基因的表达载体导入宿主细胞中，表达得到南美白对虾LvDJ-1蛋白。

所述宿主细胞为毕赤酵母。

南美白对虾LvDJ-1蛋白在制备水产动物免疫增强剂中的应用。

本发明的有益效果是：

（1）本发明首次获得了南美白对虾的LvDJ-1蛋白基因序列，可以应用于制备重组蛋白、免疫制剂和饲料添加剂，为南美白对虾的生理免疫研究提供了新的实践基础；

（2）本发明所提供的南美白对虾LvDJ-1重组蛋白，经实验证明可以提高南美白对虾抗应激能力，可以应用于制备与虾类相关的免疫制剂或饲料添加剂，具有广阔的应用潜力；

（3）将南美白对虾LvDJ-1核苷酸序列在巴斯德毕赤酵母重组菌株中表达，可以应用于产业化生存，降低了成本的投入，具有较高的经济价值。

附图说明

图1是南美白对虾LvDJ-1基因ORF的PCR扩增产物的电泳鉴定图；

图2是南美白对虾LvDJ-1基因ORF连接酶切接头（EcoRI 、KpnⅠ）的PCR扩增产物的电泳鉴定图；

图3是克隆载体pMD18-T-LvDJ-1双酶切（EcoRI 、KpnⅠ）;

图4是表达载体pPICZaA双酶切（EcoRI 、KpnⅠ）的电泳鉴定图；

图5是pPICZaA表达载体和所构建的pPICZaA-LvDJ-1表达载体单酶切 （BstXⅠ）的电泳鉴定图；

图6是重组菌株pPICZaA-LvDJ-1-X-33表达产物LvDJ-1重组蛋白的SDS-Page电泳分析图；

图7是重组菌株pPICZaA-LvDJ-1-X-33表达产物LvDJ-1重组蛋白的western blot鉴定图；