[发明专利]Npas2蛋白激动剂多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及Npas2蛋白激动剂多肽2及其应用，具体涉及具有促进Npas2蛋白表达，治疗乳腺癌的多肽。 

背景技术

昼夜节律是生物体的生理功能、生化指标和生理行为等多种生命现象以 24 小时为周期呈节律性振荡的一种生物节律。生物钟系统涉及人体系统的生理、生化和行为的各个方面，在整体水平、细胞水平影响周围器官、组织和细胞，控制和调节代谢、睡眠和觉醒、内分泌、免疫以及细胞周期等，使生命活动协调一致；在分子水平上，调控与细胞周期、细胞增殖和凋亡、DNA 损伤修复应答有关的一系列细胞因子，与恶性肿瘤的发生、发展和治疗等关系密切。因此昼夜节律紊乱可引起生物钟基因及其相关蛋白产物的异常表达，从而促使肿瘤发生，加速肿瘤进展。 

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，其死亡率的上升速度在女性恶性肿瘤位居第一。流行病学的研究表明，昼夜节律的破坏与乳腺癌的发生密切相关。Npas2在乳腺癌中表达明显下调，与乳腺癌的发生、病理和临床分期关系密切。Npas2基因是在哺乳动物中最大生物钟基因，是Clock的同源基因，可以通过调控和干扰癌基因、抑癌基因、与细胞周期、细胞增殖和凋亡相关基因，在细胞周期调控、DNA损伤修复应答和肿瘤生长抑制的过程等多方面可能参与了乳腺癌的发生和发展。研究表明，Npas2蛋白低表达与肿瘤瘤体大小、浸润深度有关，Npas2蛋白高表达对乳腺癌发展具有保护性作用。在乳腺癌癌前病变中Npas2表达增强，可以阻止癌前病变恶变。Npas2蛋白功能降低是乳腺癌发生的一个重要因素。因此，促进Npas2蛋白表达，抑制乳腺癌发展，是治疗乳腺癌的新靶点。但是，尚未有开发成熟的Npas2蛋白激动剂多肽的治疗乳腺癌的药物 

本专利中的Npas2蛋白激动剂多肽已证明在乳腺癌中有效，具有在其他肿瘤模型中开发的前景。

发明内容

发明目的

    本发明提供全新的序列，该序列Npas2蛋白激动剂多肽，对乳腺癌具有很好的疗效。

技术方案

    Npas2蛋白激动剂多肽，其特征在于其序列为EFTQLMLDDDEALDFIIAV。

Npas2蛋白激动剂多肽在制备治疗乳腺癌药物中的应用。 

有益效果

利用固相合成法化学合成Npas2蛋白激动剂多肽2，该多肽具有全新的序列，该多肽可体内促进Npas2蛋白表达，治疗乳腺癌。提高在体内荷瘤小鼠生存率；抑制人乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移；具有潜在的新药开发价值。

具体实施方式

本发明涉及的多肽由吉尔生化（上海）合成。

实施例1 

Npas2蛋白激动剂多肽对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。

采用MTT 比色法。将对数生长的人乳腺癌细胞MCF-7，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物Npas2蛋白激动剂多肽3和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养 48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。对人乳腺癌细胞MCF-7的最大增殖抑制率为92.81%。 

表1.多肽对人乳腺癌细胞MCF-73细胞增殖抑制作用 

 实施例2

Npas2蛋白激动剂多肽对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。

采用MTT 比色法。将对数生长的G519细胞，以 1.0×105加入 96 孔培养板中，培养 24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物Npas2蛋白激动剂多肽3和阳性对照药物长春新碱；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养 48h，分别在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入MTT，作用4h后，加入 DMSO，孵育 30min，在酶标仪 620nm 处测定吸光度 A 值，按公式肿瘤细胞生长抑制率＝（1-实验组吸光值/对照组吸光值）×100％。对Mino的最大增殖抑制率为72.71%。 

实施例3 

Npas2蛋白激动剂多肽1对人乳腺癌细胞MCF-7裸鼠异种移植肿瘤生长的抑制试验