[发明专利]利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体是涉及一种利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法。

背景技术

桦褐孔菌[Inonotus obliquus (Fr.)Pilat]是一著名的民间野生药用真菌。研究表明，桦褐孔菌多糖是重要的活性成分之一，具有增强免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、降血糖及抗病毒等多种药理活性，已成为国内外研究的热点领域之一。但目前对桦褐孔菌多糖的分离纯化的研究报道相对较少。

由于多糖的组成复杂性，多糖粗提物的分子量分布较广，多糖种类也很多，而且前期实验表明，提取后的桦褐孔菌粗多糖中含有一定量的蛋白和色素，影响多糖的化学结构和生物活性研究，因此有必要对多糖进行分离纯化。但去除粗多糖中的蛋白和色素，一直是多糖分离纯化中的一大难题，传统的去蛋白和去色素的方法操作繁琐、效率低。传统的去蛋白以Sevage法为主，方法操作繁琐，效率低，采用的有机溶剂有毒性因而影响多糖的生物活性；活性炭法去除色素效果较好，但后期的活性炭粉末不易去除，过氧化氢法因为较强的抗氧化活性去除色素效果很好，但对多糖的活性影响较大，因此急需探索一种新的精制方法。

大孔吸附树脂是一类不含交换基团的高分子吸附材料，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积，具有很好的吸附活性，某些大孔树脂已经用到植物多糖中的去蛋白研究中，取得了很好的效果。

申请公布号CN102603906A（申请号 201110461635.8）的中国专利文献公开了一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法：一种桦褐孔菌多糖水溶液的制备方法，包括以下步骤： 三氯乙酸脱蛋白：向桦褐孔菌提取物中加入三氯乙酸，静置，然后固液分离，取分离得到的固体物质；活性炭脱色：向步骤； 所得固体物质按体积加入50 ～ 100 倍的水，然后加入活性炭脱色，然后固液分离，取所得上清液；用天然澄清剂澄清：所得上清液加入天然澄清剂澄清。

大孔树脂用以去除桦褐孔菌粗多糖尚未见有文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种精制桦褐孔菌粗多糖的工艺，本发明的核心技术是：应用生物酶和阴离子交换吸附树脂替代传统的Sevage法、活性炭法和过氧化氢法去除蛋白和色素，适合规模化产业化制备桦褐孔菌精制多糖。

本发明的技术方案如下：

利用大孔吸附树脂DA201精制桦褐孔菌粗多糖的方法，其包括如下步骤：A．原料的脱脂预处理；B．热水浸提制备粗多糖；C．粗多糖酶解；D．大孔吸附树脂DA201处理；E．超滤去除小分子；F.真空冷冻干燥；制备桦褐孔菌多糖。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤A．原料的脱脂预处理是指，取干燥的桦褐孔菌菌核，粉碎，置于4-8倍体积的60-95%乙醇溶液中浸泡16-24 h（优选的，置于6-7倍体积的70-90%乙醇溶液中浸泡18-20 h，更加优选的，置于6.5倍体积的80%乙醇溶液中浸泡20 h），以除去脂肪、部分单（寡）糖及脂溶性色素，残渣阴凉处风干。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤B．热水浸提制备粗多糖是指，预处理后的残渣风干后，加10-20倍蒸馏水（v/w），沸水提取1-3 h， 80-120目纱布过滤（优选的，加13-18倍蒸馏水（v/w），沸水提取1.5-2.5h， 85-100目纱布过滤，更加优选的，加15倍蒸馏水（v/w），沸水提取2 h，100目纱布过滤），滤渣重复提取1-3次，合并滤液，浓缩，离心，喷雾干燥得粗多糖。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤C．粗多糖酶解是指，将粗多糖加水溶解，加入木瓜蛋白酶，35-45℃反应20-40min（优选的，36-42℃反应25-35min，更加优选的，40℃反应30min），得粗多糖的酶解液。更加优选的，粗多糖加水溶解后配制为0.5-2.0%（w/w）的水溶液（优选的，配制为0.6-1.8%（w/w）的水溶液，更加优选的，配制为1.5%（w/w）的水溶液）。更加优选的，木瓜蛋白酶加入量为粗多糖水溶液的3-5%（w/w）（优选的，加入量为粗多糖水溶液的3.5-4.5%（w/w），更加优选的，加入量为粗多糖水溶液的4.0%（w/w））。