[发明专利]玉米须活性组分的半仿生提取方法及其抗氧化作用

说明书

技术领域

本发明涉及玉米须活性组分的半仿生提取方法及其抗氧化作用，属于生物制品加工技术领域。

背景技术

玉米须(Zea mays L.)为禾本科玉蜀黍属植物玉米的花柱和柱头,含有黄酮类、多糖类、皂甙、生物碱、单宁酸、绿原酸 、蛋白质、挥发性油和类固醇等多种生物活性成分。现代药理研究证明, 玉米须的利尿、降血糖、抑菌、降压、增强免疫、抗癌等功效尤其显著。因此，有必要研究玉米须多糖和黄酮类化合物的提取方法及其生物活性；

    目前多糖和黄酮的提取方法主要有溶剂法，如浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法等，新兴的提取方法有超声波辅助提取法、微波辅助提取法、酶解法、超临界流体萃取法，还有半仿生提取法、破碎提取法、空气爆破法、亚临界流体萃取等，其中半仿生提取法是将整体药物研究法与分子药物研究法相结合，为经人类消化道给药的中药及其复方药剂创立的一种提取新技术，该法模仿口服药物在人体胃肠道中的转运过程，采用选定pH值的酸性和碱性溶剂依次提取得到活性混合物，体现中医治病综合成分作用的特点。目前，半仿生法提取法已应用于提取柚皮总黄酮（水提）、了哥王总黄酮（醇提）、半边莲黄酮苷（醇提）、叶下珠总黄酮（水提），但玉米须多糖和黄酮的半仿生浸提工艺研究尚未见报道。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于运用半仿生法原理，以特定pH的水和乙醇为溶剂，玉米须多糖和黄酮为主要活性成分，因此，以多糖和黄酮的提取量为指标，比较同样条件下传统方法黄酮、多糖的提取率和粗提取物的抗氧化性能，为玉米须的药用价值开发提供基础依据。为达到上述目的，本发明提供一种玉米须活性组分的半仿生提取方法及其抗氧化作用，所述方法包括以下步骤：

1材料与方法   

1.1实验材料与仪器

    玉米须（购于安徽亳州），芦丁对照品（0080-9705,纯度>98%)，中国药品生物制品检定所；实验用水为蒸馏水，无水乙醇，浓盐酸，氢氧化钠，浓硫酸，苯酚，无水三氯化铝，均为分析纯；

    752紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；TG328A分析天平（上海上平仪器公司）；GZX-GW·2-BS高温干燥箱（上海博泰实验设备有限公司）；PHS-3C数字式酸度计（上海理达仪器厂）；SHB-ⅢA循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；RE-52A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；HH-6数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）；

1.2 实验方法

1.2.1 多糖的含量测定

以葡萄糖为对照品，采用苯酚-硫酸方法测定玉米须多糖的含量，得回归方程: y=6.6671x+0.0202,r²=0.9994,多糖质量浓度在20.84~125.04μg/mL呈良好的线性关系；

 多糖提取率(%)=样品中多糖质量/药材质量×100%；

1.2.2 黄酮的含量测定

以芦丁为对照品，采用三氯化铝显色法测定玉米须黄酮。得回归方程为：y=24.834x+0.0071,r²=0.9995,黄酮质量浓度在10~30μg/mL呈良好的线性关系；

    黄酮提取率(%)=黄酮总含量/药材质量×100%；

1.2.3 半仿生提取

1.2.3.1 提取溶剂的制备

    根据仿生学原理，人体消化道（胃、小肠、大肠）体液的pH分别为2.0、7.5、8.3，水作溶剂提取时，由于磷酸缓冲溶液和三氯化铝溶液混合后会有白色的絮状沉淀，经多次尝试改用5%盐酸溶液和稀氢氧化钠溶液(2%）调pH；乙醇作溶剂时用磷酸缓冲溶液调pH,备用；

1.2.3.2 样品的处理与制备

    玉米须清洗去尘，晾干，粉碎，过筛（60目）后，称取2.0g于250mL圆底烧瓶中，先在pH2.0溶剂（水或不同浓度乙醇）中提取，冷却过滤，收集滤液，所得滤渣再在pH7.5，pH8.3溶剂各重复提取一次，合并滤液，减压浓缩得提取液，定容到100mL容量瓶中备用。传统提取即半仿生中优选条件排除pH因素；

1.3 抗氧化能力实验

     分别取半仿生法水提取液（SBWEP和SBWEF），传统水提取液（TWEP和TWEF），半仿生醇提液（SBEEP和SBEEF），传统醇提液（TEEP和TEEF）1、2、3、4、5mL，用蒸馏水（或60%乙醇）定容到10mL容量瓶中，备用；

1.3.1 还原力的测定