[发明专利]超氧化歧化酶的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物酶制备技术领域，尤其涉及一种超氧化歧化酶的提取方法。

背景技术

超氧化歧化酶是自然界动植物和好气微生物中普遍存在的一种重要及微量的生命物质。当代医学研究发现，人的生命阶段在在过了青少年以后，一些过氧化物等人体“垃圾”，会因来不及清除而积聚在体内。其中的过氧化游离子自由基能直接攻杀损害人体的蛋白质、核酸、细胞膜，和内脏器官，从而是人体的实质性组织器官衰老破坏。超氧化歧化酶是人体内的一种最重要的细胞保护酶，既能防辐射损伤，又能有效的抵抗过氧化游离子自由基，从而延缓衰老，调节机体代谢能力，提高人体自身的免疫功能。

超氧化歧化酶常见的生产工艺是经过采血、取血球、热处理、离心、超滤、浓缩、冷冻干燥而制成。然而由于这些工艺中大多采用了有毒药剂和有毒溶剂，对人体的健康造成了一定的威胁，而且其工艺复杂，成本过高，制得的产品超氧化歧化酶的杂质多。

发明内容

本发明提供了一种超氧化歧化酶的提取方法，该方法采用的是物理法提取超氧化歧化酶，其制得的超氧化歧化酶纯度可达到80%以上。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：

一种超氧化歧化酶的提取方法，该方法包括以下步骤：

A、将新鲜的动物血液用钴辐照18分钟～20分钟；

B、向经过步骤A处理的动物血液中加入占所述动物血液质量1%～3%的水蛭素，混合，静置2小时～3小时；

C、在B步骤反应之后，倒去其上层血清，然后再向下层红细胞中加入占所述红细胞体积1倍～2倍的维生素E，以1200转/分钟～1500转/分钟离心30分钟～40分钟；

D、将经过C步骤反应之后的混合物放入70℃～75℃的水中恒温水浴40分钟～60分钟，然后取出并立即放入冰中冷冻2分钟～3分钟，取出，静置2小时～3小时；

E、在D步骤反应之后，过滤，将得到的滤液加热至50℃～60℃，然后在搅拌情况下加入占所述滤液质量1%～2%的硫酸铜饱和溶液，搅拌时间为1分钟～5分钟；

F、在E步骤反应之后，继续在50℃～60℃和搅拌情况下加入占所述滤液质量1%～2%的硫酸铝饱和溶液和占所述滤液质量0.02%～0.04%的亚硫酸钠饱和溶液，搅拌时间为5分钟～10分钟；

G、将经过F步骤反应之后的混合物加热至60℃～65℃，并调节其pH值至5.5～6.5，然后加入硫酸铜饱和溶液；当所述混合物的颜色变为无色时，停止就加入硫酸铜饱和溶液和停止加热；

H、将经过G步骤反应之后的混合物自然冷却并静置1小时～1.5小时，过滤，浓缩。

由于采用上述技术方案，本发明具有如下有益效果：

1、本发明提供了一种成本低、无毒、无害，工艺简单，条件温和的超氧化歧化酶的提取方法。

2、本发明制得的超氧化歧化酶含有的杂质少，其纯度达到80以上。

具体实施方式

实施例1

一种超氧化歧化酶的提取方法，该方法包括以下步骤：

A、将1kg新鲜的动物血液用钴辐照18分钟；

B、向经过步骤A处理的动物血液中加入0.01kg水蛭素，混合，静置3小时；

C、在B步骤反应之后，倒去其上层血清，然后再向下层红细胞中加入占所述红细胞体积1倍的维生素E，以1200转/分钟离心40分钟；

D、将经过C步骤反应之后的混合物放入70℃的水中恒温水浴60分钟，然后取出并立即放入冰中冷冻2分钟，取出，静置2小时；

E、在D步骤反应之后，过滤，将得到的滤液加热至50℃，然后在搅拌情况下加入占所述滤液质量2%的硫酸铜饱和溶液，搅拌时间为5分钟；

F、在E步骤反应之后，继续在50℃和搅拌情况下加入占所述滤液质量2%的硫酸铝饱和溶液和占所述滤液质量0.04%的亚硫酸钠饱和溶液，搅拌时间为10分钟；

G、将经过F步骤反应之后的混合物加热至60℃，并调节其pH值至5.5，然后加入硫酸铜饱和溶液；当所述混合物的颜色变为无色时，停止就加入硫酸铜饱和溶液和停止加热；

H、将经过G步骤反应之后的混合物自然冷却并静置1小时，过滤，浓缩。

本实施例制得的超氧化歧化酶的纯度为82%。

实施例2

一种超氧化歧化酶的提取方法，该方法包括以下步骤：

A、将1kg新鲜的动物血液用钴辐照20分钟；

B、向经过步骤A处理的动物血液中加入0.03kg水蛭素，混合，静置2小时；