[发明专利]一种酒精长期保存后河蟹基因组DNA的高效提取方法

权利要求书

1.一种提取酒精长期保存后河蟹基因组的DNA方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）剪取肌肉组织；

（2）提取基因组DNA，步骤如下；

将第（1）步剪取的河蟹肌肉置烘箱烘干酒精；将肌肉组织剪碎，再加裂解缓冲液和蛋白酶K进行消化，其中裂解缓冲液和蛋白酶K的成分和浓度为：含10mmol/L EDTA，0.1mol/LNaCl，0.01M Tris-Cl的STE缓冲液，10% SDS，20mg/mL的蛋白酶K；河蟹肌肉用量与加裂解缓冲液和蛋白酶K的量之间的关系是：河蟹肌肉10-30mg，加300-500μL STE，50-150μL SDS和10-30μL蛋白酶K，于50-60℃的水浴锅中消化，直至组织消化完全溶液变得清亮透明为止；

将步骤a得到的消化液离心，取上清液加饱和NaCl溶液轻混匀；

再加氯仿颠倒轻混匀；

离心，取上清液再次加入氯仿；

离心，取上清液加入异丙醇；

离心沉淀DNA；

洗涤DNA，轻摇混匀；

离心，将沉淀DNA烘干；

在烘干后的DNA加去离子水或TE溶液，并加入RNA酶去除DNA中的RNA，保存备用。

2.根据权利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（1）步中，在剪取河蟹第二步足上的肌肉的过程中纵向剪取肌肉，烘干酒精后然后用小剪刀将组织剪碎成粉末状。

3.根据权利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，消化时间20至30小时，需将肌肉组织消化完全至溶液清亮透明。

4.根据权利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，河蟹肌肉用量与加裂解缓冲液和蛋白酶K的量之间的关系是：河蟹肌肉20mg，加400μL STE，100μL SDS和20μL蛋白酶K。

5.根据权利要求1所述的提取河蟹DNA的方法，其特征在于：第（2）步中，水浴的温度为56℃。