[发明专利]一种同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及金银花有效成分的检测方法，更具体地涉及一种能够同时对金银花的有效成分-绿原酸和木犀草苷进行定量分析的方法。

背景技术

金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花，传统中药，具有清热解毒、疏散风热、抗病毒、保肝利胆的功效。金银花主产于河南、山东等地，其主要化学成分为有机酸、三萜类、黄酮类和挥发油等，其中有机酸成分是金银花抑菌、抗病毒的活性成分。绿原酸是金银花的主要有效成分之一，不但作为其原药材的质量控制指标，也是一些成药和制剂的质量控制指标。2010版药典中以绿原酸和木犀草苷为指标性成分对金银花进行质量控制。

目前对绿原酸和木犀草苷定量分析的技术和手段主要有：薄层扫描法(TLCS)，毛细管电泳法(CE)，高效液相色谱法(HPLC)，液-质联用技术(LC-MS)等，其中以HPLC法最为普及。超高效液相色谱法(UPLC)是采用小颗粒填料色谱柱(粒径一般小于2μm)和超高压(压力大于105KPa)系统的一种分离技术，相对于HPLC，它更能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，同时可以缩短分析时间、减少有机试剂的使用等，目前已广泛应用于中草药的成分分析上。UPLC在金银花中绿原酸的定量分析上已有报道，但如何快速，准确地同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷两种成分含量的方法还有待研究。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种准确、快速而且能同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量的方法。

本发明所述同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的方法，包括以下步骤：

超声波提取：取金银花粉末过筛，按照1∶80-1∶120的固液比，加70％的乙醇水溶液，称定重量，超声提取45-60min，放冷，得金银花提取液。

定量分析：利用UPLC-PDA方法进行定量分析，其中UPLC条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH RP₁₈(100mm×2.1mm i.d.，1.7μm)；室温，流动相：A：B＝0.4％磷酸水：乙腈；梯度洗脱条件：平衡时间为5min；梯度洗脱程序：0～2min，5％～16％B；2～4min，16％～20％B；4～8min，20％～50％B；8～10min，50％～100％B；10～11min，100％～5％B；进样量：3μL，检测波长：242nm，体积流量0.2mL/min。

优选地，超声波提取步骤中，金银花粉末按照1∶120的固液比，加70％的乙醇水溶液，称定重量，超声提取45min，放冷，得金银花提取液。

优选地，在定量分析步骤中还包括：对照品溶液的制备：精密称取绿原酸，木犀草苷对照品：0.889mg，0.920mg，以乙腈-0.4％磷酸水溶液为溶剂，于棕色容量瓶中定容至2mL，作为储备液。其他不同质量浓度的对照品溶液由储备液稀释得到。

优选地，超声波提取步骤中，金银花粉末过65-80目筛。

优选地，在定量分析之前进行供试品溶液的制备，包括：取金银花提取液用70％的乙醇水溶液补足重量，摇匀，过滤，过0.22μm微孔滤膜，得供试品溶液。

本发明所述同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的方法，方法简单，能够同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷的含量，具有灵敏度高，精密度和准确度高，重复性好，稳定可靠的优点。

1，方法简单，时间短，本发明中采用超声波提取，操作简单，效率高，所述超声波提取步骤中，选用70％的乙醇水溶液大大提高提取效率，缩短了提取时间，发明人研究发现，选用70％的乙醇水溶液作为提取溶剂，提取时间仅仅需要45min即可，大大缩短了提取时间。

2，提取效率高，检测结果准确，超声波提取步骤中，金银花粉末按照1∶120的固液比，加70％的乙醇水溶液，称定重量。发明人研究发现，当金银花粉末和70％的乙醇水溶液的固液比低于1∶120时，金银花提取液中绿原酸会有过载现象，当金银花粉末和70％的乙醇水溶液的固液比高于1∶120时，木犀草苷的响应值较低，影响检测结果。

3，本发明所述同时测定金银花中绿原酸和木犀草苷含量的方法，利用超高效液相色谱法(UPLC)，超高效液相色谱法(UPLC)是采用小颗粒填料色谱柱(粒径一般小于2μm)和超高压(压力大于105KPa)系统的一种分离技术，相对于HPLC，它更能显著改善色谱峰的分离度和检测灵敏度，同时可以缩短分析时间、减少有机试剂的使用等。