[发明专利]一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种铁线莲栽培品种“维奥利特.伊利莎白”的组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。

背景技术

维奥利特·伊利莎白(英文商品名为：Clematis‘Violet Elizabeth’)属铁线莲属植物。铁线莲属(Clematis L.)隶属于毛茛科(Ranunculaceae)，为常绿或落叶藤本，罕直立灌木或宿根草本，是世界著名的观赏植物。共约355种，广布全球；我国有147种，全国各地都有分布，尤以西南地区种类较多；江苏省野生12种，5变种及1变型。

铁线莲为毛茛科铁线莲属植物的通称，是一种兼具园艺及药用双重效用的重要植物资源，靠叶柄缠绕攀援生长，茎棕红色似铁丝，其萼片花瓣状，色彩丰富，花开如莲，故得名铁线莲。其生长适应性强，园林用途广泛，观赏价值高，在垂直绿化中具有十分重要的地位，并号称“攀援皇后”。

野生种常进行种子繁殖，但种子较难发芽。栽培品种“维奥利特·伊利莎白”为杂交种，为保持其种的特性，常进行扦插繁殖。为加快繁殖速度，增加繁殖系数，采用组织培养的方法进行铁线莲“维奥利特.伊利莎白”的快速繁殖，对于“维奥利特.伊利莎白”在园林上广泛应用推广具有较强的价值。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可有效提高繁殖系数以适应引种推广及园林应用需求的铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体表面灭菌前处理：取当年生、无病虫害铁线莲栽培品种维奥利特·伊利莎白的健壮枝条，剪成1cm带芽茎段作为外植体，首先将外植体用洗衣粉溶液浸泡30min，然后用流水冲洗1h；

(2)外植体表面灭菌与初代培养：在无菌瓶中放20-30个带芽茎段外植体，首先加入75％的酒精浸泡20s，然后用无菌水冲洗2次，再用0.1％的升汞灭菌，灭菌3-8min，在灭菌过程中轻轻晃动三角瓶，使升汞与外植体充分接触，灭菌完成后用无菌水冲洗4-5次，冲洗完成后切除外植体两端与升汞接触的部分，接种于无菌的初代培养基上，每个处理接种30个外植体，在培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx的条件下，进行进行14-20d的初代培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖明显伸长，30-40d后芽点长成带有3-5节的新梢，形成无菌试管苗；

(3)继代增殖培养：逐节切下步骤(2)所述的无菌试管苗转移到增殖培养基上进行继代增殖培养30d，每个处理接种30株小苗，培养条件为培养温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(4)壮苗培养：将步骤(3)增殖后的苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养30d，培养条件为：温度为25±2℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(5)生根培养：将经过步骤(4)壮苗培养后的苗高大于3cm的苗作为生根苗，接入生根培养基中，每个处理接种30瓶，培养40d，培养条件为：温度为25±1℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx；

(6)苗的驯化和移栽：当步骤(5)所述的经过生根培养后的不定根长至1cm时，首先将生根苗在自然光照条件下炼苗2-3d，然后，敞开瓶盖再炼苗3-4d,进行生根苗的移栽，移栽前将生根苗取出，清水中轻轻漂洗生根苗粘附的培养基，洗净幼苗根系，然后移栽到基质中，移栽后浇一次透水，此时温度为25±1℃，空气相对湿度50-60％，光照时间12h/d，光照强度为2000lx，7d以后，可逐步施加水肥并常规管理。

进一步，所述的初代培养基为MS+1mg/L6-BA+0.05mg/L NAA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH为5.8。

所述的增殖培养基为MS+1mg/L6-BA+0.02mg/L NAA+200ml/L椰汁+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

所述的壮苗培养基为：MS+7g/L琼脂+30g/L蔗糖；

而所述的生根培养基为：1/2MS+1mgL-1NAA+0.5mg/L IBA+7g/L琼脂+30g/L蔗糖。

且，上述的MS包括大量元素、微量元素、铁盐和有机成分，其中，

所述的大量元素为：

所述的微量元素为：

所述的铁盐为：