[发明专利]一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法无效
| 申请号： | 201410298149.2 | 申请日： | 2014-06-27 |
| 公开（公告）号： | CN104073479A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 崔波;姜秀敏;檀琮萍;卢艳敏 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张贵宾 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 双水相 分离 纯化 氨酸 方法 | ||
1.一种双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法，以大蒜鳞茎为原料，其特征为，包括如下步骤：（1）将大蒜鳞茎去皮预冷，加入4℃的预冷提取液浸泡，在预冷的组织匀浆机中匀浆、离心，弃去蒜渣，上清液即为粗酶液；（2）将硫酸铵、磷酸二氢钠或柠檬酸三钠溶于伯瑞坦-罗宾森缓冲液中，震荡完全溶解后，再加入PEG溶液，震荡混匀，静置分相，得到双水相提取剂；（3）将粗酶液置于双水相提取剂中，震荡混匀后，离心静置分相；（4）对富集蒜氨酸酶的下相超滤，对截留液真空冷冻干燥，得到蒜氨酸酶固体。
2.根据权利要求1所述的双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（1）中，预冷提取液的pH为7.0，含有0.05mol/L磷酸二氢钠、0.05mol/L磷酸二氢钾、5mmol/L的EDTA、25μmol/L的PLP、体积比为10%的甘油和重量比为1%的氯化钠，大蒜鳞茎和预冷提取液的使用比为1g：50mL，浸泡时间为20-40min。
3.根据权利要求1所述的双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（2）中，双水相提取剂为硫酸铵/PEG体系。
4.根据权利要求1所述的双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（3）中，双水相提取剂的pH为2.0-5.0，粗酶液加入量为3-6%（v/v）。
5.根据权利要求3所述的双水相分离纯化蒜氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（2）中，PEG的分子量为1000-3000，硫酸铵的质量浓度为10-18%（w/w），PEG的质量浓度为7.5-17.5%（w/w）。
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