[发明专利]一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙有关物质的方法

权利要求书

1.一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述待测样品为醋酸阿比特龙原料、中间体及制剂的杂质，检测方法包括以下步骤：

(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，检定检测系统；

色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合物为流动相A，梯度洗脱，柱温为30～40℃，流速为1.1～1.3ml/min，检测波长为254nm；

标准品溶液的制备：分别取杂质酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质及醋酸阿比特龙对照品，精密称定，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中分别含酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质各0.01mg及醋酸阿比特龙1mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至醋酸阿比特龙主峰与相邻杂质峰及杂质与杂质峰的分离度应大于1.5，理论板数按醋酸阿比特龙计算应不低于20000；

(2)供试品溶液和对照品溶液的制备

取醋酸阿比特龙待测样品，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取醋酸阿比特龙对照品，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量

以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱，记录色谱图至醋酸阿比特龙主峰保留时间的2.5倍，按外标法以对照品溶液主峰面积计算；

(4)计算待测样品中各杂质的含量；其中，

所述酮类的结构式为：

所述阿比特龙环氧化物的结构为：

所述消除产物的结构式为：

所述双甾体杂质的结构式为：

步骤(1)所述梯度洗脱中，流动相A比例的变化范围为于0～30分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从100％变化为20％，流动相B的比例从0％变化为80％，于30～40分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从20％变化为0％，流动相B的比例从80％变化为100％，于40～45分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持0％不变，流动相B的比例保持100％不变，于45～46分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从0％变化为100％，流动相B的比例从100％变化为0％，于46至52分钟，流动相A和B回到初始比例，色谱柱重新平衡；

步骤(1)所述的有机相为甲醇和乙腈的混合物，甲醇与乙腈的比例为体积比10～40∶90～60；

步骤(1)所述流动相A中缓冲液与流动相B的比例为体积比50～70∶50～30；

所述缓冲液由水、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵、醋酸铵、碳酸氢铵、柠檬酸钠、甲酸铵中的一种或几种组成，浓度为0.005mol/L～0.1mol/L。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液为甲酸铵。

3.如权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述醋酸阿比特龙待测样品包括醋酸阿比特龙粗品、醋酸阿比特龙原料、醋酸阿比特龙片剂和醋酸阿比特龙片加速样品。