[发明专利]用微生物胞外碳酸酐酶去除碳酸钙垢的方法

权利要求书

1.利用微生物胞外碳酸酐酶去除碳酸钙垢的方法，其特征在于：包括如下步骤：1)制备分泌胞外碳酸酐酶的芽孢杆菌属细菌菌剂；2)冷冻离心，盐析粗提取出含碳酸酐酶的粗酶液；3)将粗酶液加入到生了碳酸盐水垢的工业循环水中。 

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)所述的制备分泌胞外碳酸酐酶的芽孢杆菌属细菌菌剂包括如下操作：取循环水系统冷却水，将其均匀涂布于含有60g/L碳酸钙、1μmol/L ZnSO₄的牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，将平板置于34～37℃下培养24h，挑出长好的菌落并采用划线法进行纯化；将纯化得到的菌种进行16S rRNA扩增，确定其种属；将确定后的菌种接种到LB液体培养基中进行扩大培养至稳定期，培养温度为29～31℃，摇床转速为120r/min。 

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤2)的操作具体如下：将1)中培养好的菌液在4℃、5000r/min下离心10min，取上清液，向上清液中加入(NH₄)₂SO₄使溶液饱和度达到70％，置于4℃下盐析12h后，4℃8000r/min离心30min得到蛋白质沉淀，将蛋白质沉淀溶解于25mmol/L pH7.5的Tris-H₂SO₄缓冲液中，通过G-100葡聚糖凝胶柱，洗脱收集粗酶液。 

4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于：在步骤2)中将粗酶液透析48h后用DE-52离子交换柱分离纯化，洗脱液为100mmol/L、pH7.5的Tris-H₂SO₄缓冲液，收集酶活性较高的CA溶液，用聚乙二醇20000浓缩备用。 

5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于：步骤1)中分泌胞外碳酸酐酶的芽孢杆菌属细菌为枯草芽孢杆菌和蜡样芽胞杆菌。 

6.微生物胞外碳酸酐酶在去除工业循环水中碳酸钙垢的用途。 

7.权利要求1～5任一项所述的方法在去除工业循环水中碳酸钙垢的用途。