[发明专利]冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶C、编码基因及其应用

权利要求书

1.一种冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶C，其特征在于所述脱氢酶C的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶C在生物催化3-异丙基苹果酸制备4-甲基-2-氧代戊酸中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含冬虫夏草3-异丙基苹果酸脱氢酶C重组工程菌经诱导培养获得的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮，超声破碎，将破碎混合液离心，取上清液为催化剂，以3-异丙基苹果酸水溶液为底物，以辅酶Ⅰ为辅助底物，于Tris-HCl缓冲液中，37℃、150rpm条件下反应，反应结束后，将反应液离心，取上清液即获得含有4-甲基-2-氧代戊酸的混合液，将混合液分离纯化，即获得4-甲基-2-氧代戊酸。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述底物3-异丙基苹果酸水溶液的浓度为0.1M，所述底物的初始浓度为0.02M，所述催化剂的体积用量以超声破碎前湿菌体质量计为0.01g/L，所述辅酶Ⅰ的终浓度为10g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含3-异丙基苹果酸脱氢酶C的重组工程菌接种于含终浓度50μg/ml的Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养过夜，取培养物以体积浓度2％的接种量转接于50mL含有终浓度50μg/ml Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养至菌体浓度OD600为0.6～0.8，向培养物中加入终浓度0.05mmol/L的IPTG诱导培养8h，收集湿菌体，将湿菌体在功率40％、破1s停1s条件下超声破碎，取细胞破碎混合液离心，取上清液即为催化剂。

6.一种编码权利要求1所述3-异丙基苹果酸脱氢酶C的基因。

7.如权利要求6所述的编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

8.如权利要求6或7所述的编码基因在构建能够生物催化3-异丙基苹果酸制备4-甲基-2-氧代戊酸的基因工程菌中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述的应用为：构建含有所述3-异丙基苹果酸脱氢酶C基因的重组载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有3-异丙基苹果酸脱氢酶C基因的菌体细胞。