[发明专利]基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法及其产品

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学检测装置的制备方法，具体涉及基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，和由该方法制得的产品。

背景技术

微阵列抗体芯片是将不同的抗体探针分子有序、高密度、可寻址地固定在载体上，通过抗体对目标生物分子的特异性捕获作用，再配合以特定的信号读取方法如荧光、电化学等，实现高通量检测生物分子的一种先进技术，在疾病的早期筛选、诊断和治疗效果评价及药物开发、基础生命科学研究有着重要意义，近年来得到了学术界和工业界广泛的研究兴趣。目前，微阵列抗体芯片存在的一个主要问题是其灵敏度不高，检测限达不到实际应用要求；很多时候特异性较差，容易造成假阳性或假阴性结果。因此，微阵列抗体芯片的灵敏度和特异性亟待提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，其制备方法简单，本发明的目的之二在于提供由上述方法制得的产品。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案：

1、基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法，包括如下步骤：

(1)活化载体材料：将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10％的乙醇溶液中浸没1-4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α-溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0％和0.1-1.2％的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10-90％和0.4-1％的甲醇溶液中鼓入氮气15-30分钟，再在超声条件下加入2，2’-联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为1-5mg/mL和0.45-2.5mg/mL，浸入清洗后的载玻片，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6-24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇：水体积比为1：4-4：1；

(2)采用微阵列芯片点样仪将检测抗体印刷在步骤(1)所得活化的载体材料上，点样后在18-25℃下静置，再用PBS溶液清洗即得基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。

或活化载体材料的方法用如下步骤替换，将载玻片浸没在乙醇中超声清洗，然后在3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷体积分数为1-10％的乙醇溶液中浸没1-4小时，再退火，再将载玻片浸入三乙基胺和α-溴异丁酰溴体积分数为分别0.1-1.0％和0.1-1.2％的干燥二氯甲烷或四氢呋喃溶液中至少2小时，最后取出用二氯甲烷或四氢呋喃冲洗，得清洗后的载玻片；接着向寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯体积分数分别为10-90％和0.4-1％的甲醇溶液中加入2，2’-联吡啶和溴化亚铜至终浓度分别为4.6mg/mL和3.4mg/mL，浸入清洗后的载玻片，然后加入抗坏血酸溶液至终浓度为2.4mg/mL，密封溶液并置入惰性、避光气氛箱保存6-24小时，得活化的载体材料；所述甲醇溶液中甲醇：水体积比为1：4-4：1。

优选的，所述退火为在110℃、真空退火1-4小时。

优选的，所述甲醇溶液中甲醇：水体积比为1：1。

优选的，所述步骤(1)中，所述3-环氧丙基氧丙基三甲氧基硅烷的体积分数为5％，浸泡时间为2小时。

优选的，所述步骤(1)中，三乙基胺和α-溴异丁酰溴体的体积分数为0.35％和0.6％，浸泡时间为2小时。

优选的，所述步骤(1)中，寡聚(乙二醇)甲基丙烯酸酯和甲基丙烯酸缩水甘油酯的体积分数分别为20％和0.6％。

优选的，所述步骤(1)中，2，2’-联吡啶和溴化亚铜的终浓度分别为3mg/mL和1.4mg/mL。

2、由所述的制备方法制得的基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片。

本发明的有益效果在于：本发明公开了基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片的制备方法及其产品，其制备方法简单，能够大规模的重复制得，并且制得的基于枝状聚合物的微阵列抗体芯片在溶液中能有效抑制生物分子、细胞等在载体表面的非特异性吸附，保证了高选择性检测；同时能实现高密度、高活性、高均一度的抗体蛋白固定，获得了特异性好，灵敏度高的微阵列抗体芯片，将在基础研究、肿瘤早期筛查、临床诊断等方面得到广泛使用，发挥重要作用。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图：

图1为微阵列抗体芯片的载体活化方法示意图。