[发明专利]一种抗癌活性肽变体及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及抗癌活性肽变体。

背景技术

多肽抗癌药物是近年来抗癌药物研发的热点。现有技术中，专利申请ZL200710035478.8从新疆穴居狼蛛粗毒中分离纯化获得的抗癌活性肽，为24肽。这种多肽能诱导细胞凋亡杀灭多种癌细胞，并能抑制癌细胞增殖，但对正常细胞和动物毒性较弱；同时还可抑制低氧诱导因子HIFα转录活性，从而抑制肿瘤组织血管再生，有效的抑制实体瘤生长；其抗癌活性具有高效低毒的特点，对于开发治疗肺癌、肝癌、子宫颈癌等实体瘤的药物有着较好的应用前景。

现有技术中，为了提高多肽的活性，针对多肽序列进行特异性的改变，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肽的生物活性，申请人通过大量的实验，针对该申请获得的多肽进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的变体。

发明详述

本发明涉及的多肽，序列如下：

NB：RKGWFKAMKSIAKFIAKEKLKEHL；

(NB1)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB2)：RKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB3)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKLKEHLSS；

(NB4)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKEKEHLS；

(NB5)：SRKGWFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB6)：SRKGSFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB7)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLSS；

(NB8)：SRKGFKAMKSTAKFIAKEKSKEHLS；

(NB9)：RKGWAKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

(NB10)：RKGWAKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB11)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHL；

(NB12)：RKGWIKAMKSFAKFIAKEKLKEHLS；

(NB13)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHLS；

(NB14)：RKGWWKAMKSTAKFIAKEKLKEHL；

对照1：RKGWFKAMKSWAKFIAKEKLKEHL；

对照2：RKGWSKAMKSIAKFIAKEKLKEHL。

本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：TFA盐(三氟乙酸盐)，HCl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。

本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。剂量优选在10-5～10-2mg/kg体重的范围内，以0.1％-0.5％的较高浓度全身或局部给药。对于具体治疗的最佳剂量的确定是本领域技术人员熟知的。

具体实施方式

实施例1：本发明多肽的人工化学合成

通过常规的合成方法，合成了本发明多肽，经质谱鉴定显示纯度较高，与设定序列的多肽分子结构相同。

实施例2：多肽杀灭癌细胞实验

通过MTT分析法测定了本发明多肽对Hela、CNE1和JB63种细胞株的毒性。作用浓度为40微摩尔本发明多肽。为了进一步验证，采用溶血实验检测本发明多肽对于正常细胞的毒性，结果显示200微摩尔本发明多肽只能裂解约15％的红细胞，说明本发明多肽对于正常细胞毒性较弱。在整体动物水平，我们也检测了本发明多肽的毒性，以200毫克/kg体重皮下注射小鼠没有出现明显的毒性反应(48小时内)，表明本发明多肽毒性较低，对于癌细胞具有较强的选择性。

采用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测了本发明多肽杀灭癌细胞的机制，发现本发明多肽可诱导Hela细胞凋亡，未经药物处理的Hela细胞凋亡较少，说明本发明多肽通过诱导细胞凋亡杀灭癌细胞。

本发明多肽对3中细胞株的杀灭结果