[发明专利]一种快速构建血浆DNA测序文库的方法和试剂盒有效
| 申请号： | 201410311003.7 | 申请日： | 2014-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN105296602B | 公开（公告）日： | 2020-07-17 |
| 发明（设计）人： | 陈迪;李亚丽;李天成;石燕滨;张江花;吴凯 | 申请（专利权）人： | 北京贝瑞和康医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 北京市金杜律师事务所 11256 | 代理人： | 孟凡宏;谢燕军 |
| 地址： | 100015 北京市朝阳区京*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 构建 血浆 dna 序文 方法 试剂盒 | ||
1.用于第二代高通量测序平台的血浆DNA测序文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)抽提得到小于10ng的血浆DNA；
2)将血浆DNA进行末端补平，获得末端补平后的血浆DNA；
3)将末端补平后的血浆DNA进行3’悬A，获得3’悬A后的血浆DNA；
4)将3’悬A后的血浆DNA与测序接头连接，获得连接产物；
5)对连接产物进行纯化，获得纯化产物，
其中所述纯化产物不需PCR扩增反应步骤即可获得所述血浆DNA测序文库，
其中所述步骤2)和3)在一个反应体系中进行，中间没有纯化步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)通过选自以下的一种或两种酶来进行：T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述测序接头为双链的测序接头。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述3’悬A采用klenow ex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶与Taq酶的组合。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)采用T4 DNA聚合酶进行；且所述步骤3)采用Taq酶进行。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)和4)之间进行纯化步骤；或步骤2)、3)和4)在一个反应体系中进行，中间没有纯化步骤。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤2)采用T4 DNA聚合酶进行；所述步骤3)采用Taq酶进行；且所述步骤4)采用T4 DNA连接酶和T7 DNA连接酶进行。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二代高通量测序平台选自Roche/454FLX、Illumina/Hiseq、Miseq和Life Technologies/SOLID system、PGM或Proton。
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