[发明专利]一种提高大肠杆菌乙醇耐受性的方法有效
| 申请号： | 201410311102.5 | 申请日： | 2014-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN104073509A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 黄磊;濮悦;徐志南;蔡谨 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 大肠杆菌 乙醇 耐受 方法 | ||
1.一种提高大肠杆菌乙醇耐受性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将大肠杆菌菌株E. coli DH5α中的野生型fnr基因克隆到pKSC质粒上，得到重组载体pKSC-fnr，野生型fnr基因的序列如SEQ ID NO.1所示，野生型fnr的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，pKSC质粒的序列如SEQ ID NO.3所示，重组载体pKSC-fnr的序列如SEQ ID NO.4所示；
（2）碱基替换：将步骤1得到的重组载体pKSC-fnr上的fnr基因进行碱基替换：G164A, C182T，得到优化的重组载体pKSC-fnr1；碱基替换：C409G，G665C，得到优化的重组载体pKSC-fnr2；fnr1基因的序列如SEQ ID NO.5所示，fnr1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，fnr2基因的序列如SEQ ID NO.7所示，fnr2的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，pKSC-fnr1的序列如SEQ ID NO.9所示，pKSC-fnr2的序列如SEQ ID NO.10所示；
（3）分别用pKSC-fnr1和pKSC-fnr2中的fnr1和fnr2基因替换大肠杆菌菌株E. coli DH5α中的野生型fnr基因，得到乙醇耐受性提高的大肠杆菌菌株E. coli DH5α fnr::fnr1和E. coli DH5α fnr::fnr2。
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