[发明专利]一种常压柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种常压柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法，尤其涉及一种由迷迭香提取物经常压硅胶柱柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的制备方法。

背景技术

鼠尾草酸的纯化方法主要有缓冲溶液精制法、pH值控制沉淀法、柱层析精制法，使用最多的是柱层析精制法，中压或常压柱。

缓冲溶液精制法工艺简单，便于操作，但所得鼠尾草酸的纯度不够；pH控制沉淀法纯化鼠尾草酸，所得产品纯度可以达到一定的要求，但工艺复杂，用时较长，且实验需要很低的温度来保证鼠尾草酸的冷冻结晶，能耗大；柱层析法使用较为广泛，将各种溶剂粗提的迷迭香抗氧化剂溶于二氯甲烷经聚酰胺柱分离，然后再经过二次重结晶和活性炭脱色，可以得到纯度大于95％的鼠尾草酸无色晶体(孙传经，孙云鹏.超临界CO₂反向萃取法提取迷迭香抗氧化剂的方法:中国，1327038[P].2001-12-19)，但纯化时间长，且纯化成本高；采用RP-C18填料分离纯化迷迭香提取物中的鼠尾草酸，可以得到纯度高达98％以上的鼠尾草酸(杜纪权，徐鸿，陈香雪，等.迷迭香中鼠尾草酸分离纯化及抗氧化能力指数测定[J].食品与机械，2011,27(6):87-91)；使用含量不低于15％的鼠尾草酸原料，制备纯度98％以上的鼠尾草酸，将鼠尾草酸粗品用乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用硅胶填充柱，上样后以乙酸丁酯为洗脱剂，柱塞式溶剂泵进液，洗脱后的级分分段收集，减压浓缩至干回收洗脱剂，得层析产物，层析产物用烃溶剂重结晶，结晶产物减压干燥，可获得纯度98％以上的鼠尾草酸产品(祖元刚，杨磊，祖柏实，等.一种连续中压柱层析制备高纯度鼠尾草酸的方法:中国,101851158A[P].2010-10-06.)

发明内容

本发明提供一种常压柱层析从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法，具有成本低、能耗低、纯化效率高、溶剂残留少且容易回收、污染小的特点。

本发明提供如下技术方案：

一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的方法，将迷迭香提取物用乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用硅胶填充层析柱，将硅胶用等体积的石油醚分散均匀后匀浆湿法装柱，上样后以乙酸丁酯和石油醚作为洗脱剂，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，30～60℃减压浓缩至干得层析产物，可得到纯度98％以上的鼠尾草酸产品。

有益效果：

(1)本发明采用常压柱层析分离纯化方法，从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸，仅通过一步常压硅胶柱柱层析即可快速、高效地得到足够纯度的鼠尾草酸。

(2)使用常规易得的有机溶剂，价格低廉、回收方便、残留少、污染小；

(3)本发明在较低温度和较短时间内实现对迷迭香提取物中的活性成分鼠尾草酸进行分离纯化，操作方便，能耗低，不需使用特殊高温高压设备，提高了原料和设备利用率。

其中，本发明涉及的HPLC分析方法，液相色谱仪为岛津LC-20AT，采用C18反相色谱柱(150mm×4.6mm×5μm)，进样量20μL，采用PDA检测器进行多波长扫描。流动相采用两种混合展开溶剂，即溶剂A(乙腈-水-乙酸，体积比15∶84∶0.85)和溶剂B(甲醇)，采用梯度洗脱方法(即：30min内由90％A和10％B递增到100％B，保持5min，4min内返回90％A和10％B，再保持3min)，控制流速为1.5mL/min，柱温为40℃，检测波长为284nm。

样品中鼠尾草酸的含量和质量，主要利用标准样品所测标准曲线进行定量计算。

附图说明

图1为鼠尾草酸纯化产品的HPLC图(284nm)。

具体实施方式

一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的常压柱层析纯化方法，本方法使用迷迭香叶经乙醇超声辅助提取所得的迷迭香提取物，将一定量的迷迭香提取物用1～2mL乙酸丁酯溶解，得上柱样品，使用相当于迷迭香提取物80～500倍(w/w)的硅胶填充层析柱，将硅胶用等体积的石油醚(60～90℃)分散均匀后匀浆湿法装柱，上样后以乙酸丁酯和石油醚(60～90℃)的体积比为4:1～10作为洗脱剂，流速为2～8mL/min，洗脱后的级分分段收集，合并具有相同成分的级分，30～60℃减压浓缩至干得层析产物，可获得纯度98％以上的鼠尾草酸产品。

一种从迷迭香提取物中分离纯化鼠尾草酸的常压柱层析分离纯化方法，具体方法如下：