[发明专利]泛硫乙胺样品中其对映异构体杂质的分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学分析技术领域，更具体涉及泛硫乙胺及其组合物中泛硫乙胺对映异构体的分析方法。

背景技术

泛硫乙胺是泛酰巯基乙胺稳定的二硫化物前药，泛酰巯基乙胺是构成辅酶A的重要成分，而辅酶A是脂质代谢和糖代谢的中心环节。泛硫乙胺的促进代谢作用可能机制是其为辅酶A(CoA)和酰基转移蛋白(ACP)合成的原料。其中，辅酶A(CoA)参与了超过70种酶代谢途径，包括脂肪酸氧化、糖代谢、丙酮酸代谢、氨基酸分解代谢、亚铁血红素合成、乙酰胆碱合成、II相乙酰化解毒反应。酰基转移蛋白(ACP)是脂肪酸合成酶复合物必须成分之一。

泛硫乙胺是两分子泛酰巯基乙胺中巯基氧化为分子间二硫键后的稳定产物。泛硫乙胺一般采用D-泛酸钙与胱胺反应制得，由于起始原料D-泛酸钙原料中多少会存在异构体L-泛酸钙，L-泛酸钙与胱胺反应会生成泛硫乙胺对映异构体，也即产品的杂质。反应路线如下所示。

泛硫乙胺及对映异构体其结构式及分子量如下：

本领域对于手性化合物对映异构体的高效液相色谱分析方法，一般采用手性色谱柱。对于药品的对映异构体的分离检测，所选用的色谱柱、流动相等条件各有差异。色谱条件的选择是结合化合物本身性质、流动相的极性及他们的相互作用等因素，进行综合考量，选择适合待检样品的方法的过程。不同化合物的HPLC检测条件之间并没有明确的参考意义。

有必要开发一种稳定可行的分析方法用于分离泛硫乙胺与其对映异构体，但尚无文献报道其分离分析的方法。

发明内容

本发明公开了一种在泛硫乙胺样品中其对映异构体杂质的分析方法，所述的泛硫乙胺样品可以是泛硫乙胺，也可以是含泛硫乙胺的组合物。

为了检测泛硫乙胺样品中其对映异构体杂质含量，在前期研究中，发明人尝试了多种技术方案。如使用C18柱及采用柱前用右旋樟脑-10-磺酰氯进行衍生化、OD-H柱、AD-H柱均不能将泛硫乙胺与其异构体进行有效分离从而达到检测的目的。后来，发明人尝试将样品先水解，再用高效液相色谱法分析检测，结果方法简单，检测结果准确。

本发明首先将样品水解成D-泛解酸或其盐与其对映异构体，然后再分离检测。

水解的反应机理为：

上述R-泛解酸钠又名D-泛解酸钠,S-泛解酸钠又名L-泛解酸钠。

该方法克服了无法直接分离泛硫乙胺与其异构体的缺陷，根据其水解产物构型不会发生变化，而采用其水解产物来分离分析。

本发明水解方案可以采用多种，比如高温破坏。优选在强碱环境中水解。在强碱中水解后，即可用于检测。但是为了保护色谱柱，优选加酸中和后再分离检测。

强碱包括碱金属和碱土金属的氢氧化物等，最优选的强碱为氢氧化钠或氢氧化钾。

水解条件优选50～100℃水浴中加热30～60min，

用于中和的酸包括无机酸和有机酸，有机酸包括枸橼酸、醋酸、甲酸等，无机酸包括盐酸、硫酸、硝酸、磷酸等。优选无机酸，最优选盐酸。

中和终点pH值优选为4～8，更优选中和终点pH值为5～7。

一个优选的水解方法是，将150mg泛硫乙胺待测样品，置10ml量瓶中，用1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，在80℃水浴中加热50min，取出，用1mol/L盐酸调节pH至5～7。

优选的色谱分析条件是：色谱柱是手性柱，流动相为硫酸铜-异丙醇的混合液，两者体积比优选80～95:20～5；流速优选0.5～2ml/min；柱温优选20～50℃。

优选手性柱的配位体交换型手性固定相为(D)-青霉胺。

流动相硫酸铜浓度为2mmol/L。硫酸铜-异丙醇体积比最优选90：10。流速最优选为1ml/min

高效液相色谱色谱分离后可采用多种检测器检测，比如蒸发光检测器，紫外检测器，优选紫外检测器。

紫外检测器的检测波长优选254nm。

泛硫乙胺样品中泛硫乙胺对映异构体检测方法还可以首先将泛硫乙胺从组合物中提取出来，再用强碱溶液水解，后经酸中和，然后再采用高效液相色谱分析，并采用紫外检测器检测。各自含量可以采用峰面积归一法或者外标法计算。