[发明专利]用于鉴定布鲁氏菌自然感染或免疫接种家畜的方法

权利要求书

1.一种用于鉴定布鲁氏菌自然感染或免疫接种家畜的方法，其特征在于，其是将Omp31蛋白或含His标签的重组Omp31蛋白作为布鲁氏菌种间差异标识蛋白，且以Bp26蛋白或含His标签的重组Bp26蛋白作为阳性对照蛋白，对于布鲁氏菌感染血清SAT呈阳性的家畜，Bp26蛋白或含His标签的重组Bp26蛋白与不同种的布鲁氏菌感染血清均发生反应，而Omp31蛋白或含His标签的重组Omp31蛋白仅与除牛种布鲁氏菌以外的其它种的布鲁氏菌感染血清发生反应，进而判定SAT呈阳性的家畜为布鲁氏菌自然感染或免疫接种。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用蛋白免疫印迹法检测蛋白与布鲁氏菌感染血清中抗相应蛋白的特异性抗体之间的反应。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含His标签的重组Omp31蛋白以及含His标签的重组Bp26蛋白的制备方法为：

1)从NCBI上获取bp26和omp31的基因序列，分别设计引物，PCR扩增bp26基因和omp31基因；

2)分别对步骤1)的扩增产物进行酶切，然后将bp26基因片段与经过相同酶切的pET30a质粒连接，将omp31基因片段与经过相同酶切的pET32a质粒连接，分别将连接产物转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆；

3)将步骤2)中筛选到的阳性克隆分别接种到含相应抗生素的LB液体培养基中，加入诱导剂IPTG进行诱导，将诱导后的菌液离心，收集菌体，加入PBS液重悬菌体，超声破碎后离心，所得沉淀用尿素溶解，离心后收集上清，用孔径0.45μm的滤膜过滤，滤液过His标签蛋白纯化柱，即得含His标签的重组蛋白。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用于PCR扩增bp26基因的引物包括：

上游引物：5’-CCGGAATTCATGAACACTCGTGCTAGCAA-3’和

下游引物：5’-CCGCTCGAGTTACTTGATTTCAAAAACGACAT-3’。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用于PCR扩增omp31基因的引物包括：

上游引物：5’-CCGGAATTCATGAAATCCGTAATTTTGGC-3’和

下游引物：5’-CCGGAATTCATGAAATCCGTAATTTTGGC-3’。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述家畜包括但不限于牛。

7.用于鉴定布鲁氏菌自然感染或免疫接种家畜的试剂盒，其特征在于，以Omp31蛋白或含His标签的重组Omp31蛋白，以及Bp26蛋白或含His标签的重组Bp26蛋白作为包被抗原。