[发明专利]利用组织培养法生产苹果类黄酮有效
| 申请号： | 201410315266.5 | 申请日： | 2014-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN104115747A | 公开（公告）日： | 2014-10-29 |
| 发明（设计）人： | 冀晓昊;陈学森;张宗营;王楠;姜生辉;毛志泉;吴树敬;陈晓流;张艳敏 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 组织培养 生产 苹果 类黄酮 | ||
1.一种利用组织培养法制备类黄酮含量高的苹果愈伤组织的方法，包括如下步骤：
1)将R6R6基因型苹果外植体在愈伤组织诱导培养基中诱导培养，得到愈伤组织；
2)将所述愈伤组织在继代培养基中继代培养，得到继代愈伤组织；
3)将所述继代愈伤组织在增强培养基中增强培养，得到增强后愈伤组织，即为类黄酮含量高的苹果愈伤组织。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
所述愈伤组织诱导培养基由终浓度为2.5mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、0.1mg/L KT、MS液体培养基、凝固剂和水组成；
所述继代培养基由终浓度为0.3mg/L NAA、1.0mg/L6-BA、MS液体培养基、凝固剂和水组成；
所述增强培养基由无N MS培养基、终浓度为0.3mg/L的NAA、终浓度为1.0mg/L的6-BA、水和凝固剂组成。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述凝固剂为为琼脂，所述凝固剂在其所在的培养基中的终浓度均为7g/L。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述诱导培养的条件为先24℃暗培养2周，再光周期为16/8h培养2～3周，光照强度50umol m-2s-1；
所述继代培养的条件为24℃、16/8h、光照强度50umol m-2s-1、培养2周；
所述增强培养的条件为：24℃、16/8h、光照强度50umol m-2s-1、培养15天。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述类黄酮含量高的苹果愈伤组织为类黄酮含量高于10mg/g的苹果愈伤组织或类黄酮含量高于15mg/g的苹果愈伤组织或类黄酮含量高于20mg/g的苹果愈伤组织或类黄酮含量高于25mg/g的苹果愈伤组织或类黄酮含量高于28mg/g的苹果愈伤组织。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述R6R6基因型苹果为以新疆红肉苹果为父本，红富士苹果为母本进行杂交，选取杂交子代苹果中R6R6基因型苹果；
所述R6R6基因型苹果具体为紫红1号，所述外植体为叶片。
7.一种利用组织培养法制备类黄酮含量高的苹果愈伤组织的培养基组，由单独使用的愈伤组织诱导培养基、继代培养基和增强培养基组成，
所述愈伤组织诱导培养基由终浓度为2.5mg/L2,4-D、0.5mg/L6-BA、0.1mg/L KT、MS液体培养基、凝固剂和水组成；
所述继代培养基由终浓度为0.3mg/L NAA、1.0mg/L6-BA、MS液体培养基、凝固剂和水组成；
所述增强培养基由无N MS培养基、终浓度为0.3mg/L的NAA、终浓度为1.0mg/L的6-BA、水和凝固剂组成。
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