[发明专利]一种醇脱氢酶及其在合成度罗西汀中间体中的应用

权利要求书

1.一种醇脱氢酶，其是由SEQ ID No:2所示氨基酸序列组成的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的醇脱氢酶的分离的核酸。

3.根据权利要求2所述的核酸，其是由SEQ ID No:1所示核苷酸序列组成的。

4.包含权利要求2或3所述的核酸的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其选自质粒、粘粒、噬菌体或病毒载体。

6.根据权利要求5所述的重组表达载体，其是pET28a。

7.包含权利要求4-6任一项所述的重组表达载体的重组表达转化体。

8.根据权利要求7所述的重组表达转化体，其是大肠杆菌。

9.根据权利要求8所述的重组表达转化体，其是E.coli BL21(DE3)或E.coli DH5α。

10.一种重组醇脱氢酶的制备方法，包括培养权利要求7-9任一项所述的重组表达转化体，以及从培养物中获得重组醇脱氢酶。

11.一种催化羰基化合物进行不对称还原反应形成光学活性羟基化合物的催化剂，其选自权利要求7-9任一项所述的重组表达转化体的培养物，或通过将该培养物离心分离后得到的转化体细胞或者用其加工的制品。

12.权利要求1所述的醇脱氢酶，权利要求10所述的方法制备的重组醇脱氢酶，或权利要求11所述的催化剂在催化羰基化合物进行不对称还原反应形成光学活性羟基化合物中的应用。

13.根据权利要求12所述的应用，所述的羰基化合物选自以下化合物：

其中，

X选自离去基团、-NR₁R₂；R₁、R₂各自独立地选自H、碳链长度为1～8的烷基、苄基或含有1～8个碳原子的烷氧羰基。

14.根据权利要求13所述的应用，其中所述离去基团选自卤素、甲苯磺酸酯基、甲磺酰基、酰氧基、苯乙酰氧基、烷氧基、(杂)芳氧基。

15.根据权利要求13所述的应用，其中X选自卤素、-N(CH₃)₂、-NHBn或-NHBoc。

16.根据权利要求15所述的应用，其中X选自Cl、-N(CH₃)₂、-NHBn或-NHBoc。

17.根据权利要求16所述的应用，其中X为-N(CH₃)₂。

18.根据权利要求13-17任一项所述的应用，其中所述不对称还原反应在含有氢氧化钠的pH 5.0～8.0的异丙醇水溶液中进行。

19.根据权利要求18所述的应用，其中所述异丙醇水溶液中还添加0～1.0mM的NADP⁺或NAD⁺。

20.根据权利要求13-17任一项所述的应用，其中所述不对称还原反应在含有葡萄糖脱氢酶、葡萄糖的pH 5.0～8.0的水溶液中进行。

21.根据权利要求20所述的应用，其中所述水溶液中还添加0～1.0mM的NADP⁺或NAD⁺。

22.根据权利要求20所述的应用，其中，葡萄糖的含量为5～200g/L，葡萄糖脱氢酶的含量为0.01～1g/L。

23.根据权利要求18所述的应用，其中，在反应液中羰基化合物的浓度为1～200g/L，醇脱氢酶或重组醇脱氢酶的用量为0.01～10g/L，反应在振荡或搅拌条件下进行，反应温度为20～35℃。

24.根据权利要求20所述的应用，其中，在反应液中羰基化合物的浓度为1～200g/L，醇脱氢酶或重组醇脱氢酶的用量为0.01～10g/L，反应在振荡或搅拌条件下进行，反应温度为20～35℃。