[发明专利]一种金针菇F3菌种的SSR标记指纹图谱与应用

说明书

技术领域

本发明属于金针菇菌种的检测领域，特别涉及一种金针菇F3菌种的SSR标记指纹图谱与应用。

背景技术

金针菇[Flammulina velutipes(Fr.)Sing.]又名金菇、朴菇、构菌、青杠菌、毛柄金钱菌，在分类上属于伞菌目白蘑科小火焰菌属。金针菇分布广泛，营养丰富，是一种经济价值很高的食用菌和药用菌，也是市场上十分走俏的天然保健食品之一。金针菇是中国主要栽培食用菌和现代工厂化生产主要食用菌之一，2013年国内工厂化日生产量达到2700吨。

优质菌种在金针菇单产和质量中的贡献率举足轻重，这决定了金针菇菌种在金针菇产业中的重要地位。1999年我国签署了《国际植物新品种保护法》，这不仅要求我们尊重其它国家的品种知识产权，同时也要加强保护我们国家自己的品种知识产权，为了建立食用菌新品种登记制度来真正保护我国的品种产权，必须首先建立成熟的品种鉴定技术，为新品种登记奠定基础。尤其日本2004年4月1日开始实行《种苗法修正案》，对我国食用菌尤其是金针菇的生产构成了极大的威胁。就国内而言，金针菇栽培菌种“同种异名，异种同名”的现象，不仅给菇农带来了极大的损失，影响了他们的栽培积极性，也极大地影响了中国金针菇产业的发展；而且，随着大规模的工厂化栽培方式的出现，对金针菇栽培菌株质量的要求越来越高，需要发展更为简便、快速、准确的菌株鉴定技术，以保证每批次的用种都准确无误。

面对这种局势，就需要我们进一步加快菌种鉴定技术的研究，在金针菇的研究中建立更为有效的菌种鉴定体系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种金针菇F3菌种的SSR标记指纹图谱及其构建方法与应用，该指纹图谱与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短，准确性高，重复性好的优点。

本发明的一种金针菇F3菌种的SSR标记指纹图谱，该指纹图谱由6对SSR标记组成，是基于金针菇基因组简单重复序列片段开发SSR引物，扩增带型好，重复性高的SSR引物，标记详细信息如表1。

表1 SSR标记详细信息列表

本发明的一种金针菇F3菌种的SSR标记指纹图谱的应用，是利用金针菇基因组简单重复序列片段开发的6对SSR引物，通过对收集的24份国内主要金针菇栽培品种的SSR引物带型扩增，本发明确定了6对SSR引物在金针菇F3菌种中扩增出的等位片段的数量并编号(表2)，通过不同SSR等位片段的编号组合可有效识别F3菌种(图2-7)。通过对照50bp DNAladder可确定各SSR引物扩增的等位片段的相对分子量，存在F3菌种特异SSR等位片段组合的菌种，即是金针菇F3菌种，该菌种的编号组合为：(1+2)12(1+2)(1+2+3+4)(1+3)。

表2SSR引物扩增的等位片段信息汇总表

有益效果

本发明与常规形态学检测、拮抗试验、出菇试验相比，具有检测时间短，准确性高，重复性好的优点。检测所需时间只需要3～4天，而常规的拮抗试验所需时间至少需要两周时间，出菇试验则需要至少2个月的时间；该方法在所收集的我国24个金针菇主栽菌种中具有F3菌种的专一性，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为金针菇F3菌种SSR标记指纹图谱，其中M是50bp DNA ladder，数字代表的是所用的6对SSR引物，C是空白对照，箭头所指的是金针菇F3菌种的稳定且特异的SSR等位片段组合；

图2为引物Fv_fp0001在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱；

图3为引物Fv_fp0002在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱；

图4为引物Fv_fp0003在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱；

图5为引物Fv_fp0004在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱；

图6为引物Fv_fp0005在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱；

图7为引物Fv_fp0006在所选金针菇栽培材料中的扩增图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1