[发明专利]一种脆弱拟杆菌的液固结合发酵工艺

权利要求书

1.一种脆弱拟杆菌的液固结合发酵工艺为：

首先制取液体培养液，其重量百分比为蛋白胨0.5-2.5%、葡萄糖0.2-0.5%、半胱氨酸0.001-0.5%、NaCl0.2-0.5%、NaHPO₄0.1-0.3%、硫乙醇酸钠0.02-0.1%、牛肝浸液30-60%、牛肉浸液30-60%、酵母膏0.1-0.8%；

一级菌种培养

以上述培养液作为培养基，装入细口试验瓶，121℃灭菌40分钟，然后接种5%原种培养物，在培养基上覆盖0.5mm的无菌食用植物油，然后以磨口瓶盖分封口，最后将培养器皿置于38℃真空培养箱培养48小时；

二级菌种培养

培养基及操作同以及菌种培养，但培养器皿换为无色透明试剂瓶，接种一级菌种10%后，每隔5小时晃动1分钟，培养48小时，当细胞达到1.0亿CFU/g时终止培养，室温下保存备用；

（4）固体培养

制备固体培养基，豆粕粉1000g，浸润后进行蒸煮灭菌，将步骤3中的二级菌种培养液和固体培养基按照重量比0.1:1混合在一起，然后将培养物放入真空无菌室进行培养，恒温38℃，发酵48个小时，至细胞数达4-6亿。