[发明专利]用于检测金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、使用方法、用途

说明书

技术领域

本发明涉及临床关联微生物的检测领域，具体涉及检测金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的肽核酸探针组。 

背景技术

葡萄球菌属包括多数为非致病菌，少数可导致疾病，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)是葡萄球菌属的两种主要致病菌。60％-70％的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)可被相应噬菌体裂解，表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)不敏感。葡萄球菌属(Staphylococcus)是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。但在脓汁、乳汁、液体培养基中呈双球或短链排列。 

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是人类的一种重要病原菌，其引起的感染仅次于大肠杆菌占第二位，可引起局部化脓性感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身性感染。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可以找到，食品极易受到其污染。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)肠毒素是个世界性卫生难题，在美国金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)肠毒素引起的食物中毒事件，占整个细菌性食物中毒事件的33％，加拿大则更多，占到45％， 中国金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)引起的食物中毒事件也时有发生。抗生素在医院的广泛使用，使得金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的耐药性越来越强，几乎所有常用的抗生素耐药菌株都可以分离到。特别是耐药性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，能抵抗所有青霉素，包括甲氧西林及其他抗β内酰胺酶的青霉素，仅对万古霉素和替考拉宁敏感。 

表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)是广泛存在于皮肤表面的条件致病菌，随着抗生素的广泛应用，医疗技术的进步，该菌已成为免疫缺陷者医院内感染(包括伤口感染和插管感染)的常见致病菌，其引起败血症、慢性前列腺炎的趋势以日俱增。表皮葡萄球菌的耐药现象非常严重，文献报道其对目前广泛应用的青霉素、氨苄西林、苯唑西林、红霉素等都有很高的耐药性。 

肽核酸(peptide nucleic acids，PNA)是1991年由丹麦科学家Nielsen等人设计的一种以中性酰胺键为骨架的全新的DNA模拟物，其骨架结构单元为(2-氨乙基)甘氨酸，碱基部分通过亚甲基羰基连接于主骨架的氨基N上，可以序列特异地与DNA、RNA结合。其骨架为电中性，与DNA-DNA或RNA-DNA互补链相比，PNA-DNA和PNA-RNA互补不存在静电排斥作用，因此具有很高的DNA或RNA亲和性，在无错配的情况下其结合具有高稳定性，且杂交速度快，具有良好的细胞穿透性，是核酸探针的良好选择。 

现有的葡萄球菌检测方法都需要对细菌DNA进行提取，然后再进行PCR扩增，或者对菌液进行扩增，再以扩增产物进行检测，费时费工，步骤繁琐，并且假阳性高，容易造成错判。 

发明内容

本发明的目的是提供一种不需要提取DNA，不需要PCR扩增即可检测金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的肽核酸探针组及其试剂盒、方法，高效快捷，假阳性低。 

为达到上述目的，本发明的技术方案是：用于荧光原位杂交检测金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的肽核酸探针组，其特征在于：该肽核酸探针组的DNA序列如SEQ NO：1、SEQ NO：2所示； 

其中，所述SEQ NO：1序列是：5’-GCT TCT CGT CCG TTC-3’，用于检测金黄色葡萄球菌； 

其中，所述SEQ NO：2序列是：5’-AAT ATA TTA TCC GGT-3’，用于检测表皮葡萄球菌； 

其中，所述SEQ NO：1序列或SEQ NO：2序列可分别使用，用来分别检测金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌；也可同时使用，用来同时检测金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。 

所述肽核酸探针组能在金黄色葡萄球菌和/或表皮葡萄球菌的rRNA、rDNA或互补的rRNA序列中检测靶序列。