[发明专利]microRNAs基因及其在提高绿藻脂肪酸含量的应用

权利要求书

1.莱茵衣藻microRNAs基因，其特征在于其序列为SEQ ID NO.1或者SEQ ID NO.2。

2.权利要求1所述的microRNAs基因在提高绿藻脂肪酸含量中的应用。

3.一种基于权利要求1所述的莱茵衣藻microRNAs基因通过调控绿藻代谢关键酶的活性来促进脂肪酸合成的方法，构建能够通过光强或温度等手段诱导microRNAs基因表达的转基因藻，以microRNAs及其靶基因作为工具，调控绿藻代谢关键酶的合成代谢，从而使绿藻细胞积累更多的脂肪酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于影响绿藻合成代谢的关键酶靶基因—磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于构建能够通过光强或温度等手段诱导microRNAs基因表达的转基因藻，具体方法如下：

1)转基因受体藻的筛选与培养：采用TAP、BBM等绿藻培养基，在光照90～200μE/m²·s的条件下通气培养真核绿藻(如莱茵衣藻等)；

2)根据权利要求3的方法确定的序列，人工合成可调控靶基因的microRNAs；

3)构建绿藻表达载体：将microRNAs插入带有特异性启动子(强光诱导或热激诱导等)的绿藻表达载体；

4)表达载体的遗传转化与转基因藻的筛选：将带有microRNAs基因的表达载体，通过“珠磨法”、基因枪法或电击转化法进行遗传转化，通过抗性平板筛选或营养缺陷型筛选，获得阳性藻落，进行分子检测和表达产物分析，确定得到能够诱导表达microRNAs基因的转基因藻。

6.根据权利要求3所述方法，其特征在于应用基于microRNAs调控的转基因藻提高绿藻脂肪酸的含量。