[发明专利]一种鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法

权利要求书

1.一种鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)选择待鉴定籽莲品种的颗粒饱满、充分成熟的当年莲子，将含莲子种脐一端的种壳破一小口；再将破口的莲子进行催芽；2)待莲子萌发长出带根的实生苗时接种莲腐败病病原菌；3)将接种后的实生苗移栽栽培，按照病害评价等级对叶片进行病害等级鉴定，据此确定植株品种的抗病能力。

2.根据权利要求1所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：所述的莲真菌性腐败病病原菌为尖孢镰刀菌莲专化型，是从籽莲发病植株上分离纯化，经过分子鉴定，并接种于新鲜藕块上筛选出的强致病性菌株。

3.根据权利要求1所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：接种新鲜藕块筛选出强致病性菌株的过程为：经过分离纯化和分子鉴定的供试镰刀菌菌株用PDA培养基培养5-6d，取嫩藕节6-8cm长的中间段，纵剖切取获得用于接种的藕块；用直径为5-7mm无菌打孔器自菌落的边缘打取菌饼，菌饼置于藕块的中央，菌丝体面朝下，每个藕块均匀接种两个镰刀菌菌饼，然后将装有接种藕块的发芽盒放置于24-26℃恒温培养箱中进行保湿培养；依据发病藕块的病情程度来判断、选取强致病性菌株作为籽莲品种抗病菌鉴定的接种菌株。

4.根据权利要求3所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：接种新鲜藕块依据发病藕块的病情程度来判断菌株的致病力强弱，病情分级标准为：0级：藕块生长正常、完好；1级：藕块表面有轻微病变，病变尚未侵及藕块体内组织；2级：藕块组织有明显病变，维管束呈褐色；3级：藕块维管束呈深褐色，病变部分占藕块总面积的10％以下；4级：藕块维管束呈深褐色，病变部分占藕块总面积的10％～30％；5级：藕块维管束呈深褐色，病变部分占藕块总面积的30％以上，每个藕块为一计量单位。病情指数＝∑(各级藕块数×相对级数值)/(调查总藕块数×5)×100；腐败病病原菌致病力强弱的划分标准：病情指数>70，表示强致病力；30≤病情指数≤70，表示中致病力；病情指数<30，表示弱致病力；病情指数为0，表示无致病力。

5.根据权利要求1所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：待莲子萌发长出直立的幼叶、生根3-5条时，接种莲腐败病病原菌。

6.根据权利要求1或5所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：将破口的莲子在灭菌水中，24-26℃条件下催芽，每天换水一次。

7.根据权利要求1或5所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：莲腐败病病原菌在超净工作台上按以下操作进行接种：将每条根在距根尖0.5cm处剪断，以造成根系的微伤口，然后将整个根系浸入由无菌水调节的含10⁵-10⁶个孢子/mL莲腐败病病原菌悬浮液中20-40min。

8.根据权利要求1所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：将接种后的实生苗移栽于盆钵中栽培，接种至少20d后，按照病害评价等级对叶片进行病害等级鉴定，鉴定后计算病情指数，病情指数＝∑(各级病叶数×相对级数值)/(调查总叶片数×6)×100，依据病情指数，确定籽莲品种对腐败病的抗病性类型。

9.根据权利要求1或8所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：病害评价等级分为1-6级，具体是：0级-植株叶片未见任何发病症状；1级-叶片仅叶缘出现零星病斑，病斑面积不超过叶该叶片总面积的5％；2级-病斑沿叶缘连片，并向叶片中心发展，病斑面积占该叶片总面积的5％-20％；3级-病斑面积占该叶片总面积的20％-40％；4-病斑面积占该叶片总面积的40％-60％；5级-病斑面积占该叶片总面积的60％-80％；6级-病斑面积占该叶片总面积的80％-100％，叶片褐腐死亡。

10.根据权利要求9所述的鉴定籽莲品种对镰刀菌腐败病抗病性的方法，其特征在于：籽莲不同品种对腐败病的抗性评价根据病情指数分成6个等级：高抗≤10；10＜抗病≤20：20＜中抗≤40；40＜中感≤60；60＜感病≤80；80＜高感≤100。