[发明专利]复方女贞子对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠模型的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于药理实验领域，尤其涉及一种复方女贞子对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠模型的构建方法。

背景技术

中国是世界上最重要的生猪养殖和猪肉消费大国，拥有悠久的养猪传统。多杀性巴氏杆菌病是猪场常见病之一，目前主要使用疫苗预防该病，但是该菌分布广泛，血清型多，致使疫苗预防效果不佳。现代中药药理学研究表明，“滋补”类中药具有一定的免疫增强作用，本发明根据中药配伍原则和组方理论，将性能相关的中药配合应用，筛选和优化经验配方得到女贞子、淫羊藿、白术、茯苓四味中药组成“复方女贞子”作为免疫增强剂饲喂小白鼠，考察其对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠的保护作用及其机理。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复方女贞子对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠模型的构建方法，旨在考察复方女贞子对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠的保护作用及其机理。

本发明是这样实现的，一种复方女贞子对猪多杀性巴氏杆菌感染小鼠模型的构建方法包括：

步骤一、用女贞子、淫羊藿、白术、茯苓制备复方女贞子，女贞子、淫羊藿、白术、茯苓的质量比为2∶1.5∶1∶1；以药材的10倍水量采用水提法提取浓缩制成1∶1的复方女贞子药液(1mL药液相当于1g原药材)，再分别稀释成1∶20、1∶40和1∶80的复方女贞子药液，均匀喷雾于全价鼠料的表面，制成含复方女贞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，备用；

步骤二、将实验小鼠分组及处理，用于猪多杀性巴氏杆菌半数致死量的测定；

步骤三、饲喂结束后，对小鼠进行碳粒廓清试验；

步骤四、对小鼠进行溶菌酶活性的测定；

步骤五、进行猪多杀性巴氏杆菌对小鼠半数致死量的测定；

步骤六、对感染猪多杀性巴氏杆菌小鼠保护作用；

步骤七、数据分析。

进一步，所述的制备复方女贞子的具体方法为：

以药材的10倍水量采用水提法提取浓缩制成1∶1的复方女贞子药液(1mL药液相当于1g原药材)，再分别稀释成1∶20、1∶40和1∶80的复方女贞子药液，均匀喷雾于全价鼠料的表面，制成含复方女贞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，备用。

进一步，将实验小鼠分组及处理的具体方法为：

80只3周龄和60只8周龄SPF级白雄鼠，饲喂灭菌饲料和饮水，室内温度为28℃，相对湿度为(50±10)％，动物饲养适应3天后进行试验，将80只3周龄小鼠随机分成4组，每组20只，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为实验组，分别饲喂含复含方女贞子0.05％、0.1％、0.15％(w/w)的鼠料，Ⅳ组为对照组，饲喂普通鼠料，连续饲喂30d，60只7周龄小鼠用于猪多杀性巴氏杆菌半数致死量的测定。

进一步，碳粒廓清试验的具体方法为：

饲喂结束后，每组随机取10只小鼠，称重，每只小鼠使用胰岛素注射器由尾静脉注入0.1mL/10g的印度墨汁(生理盐水稀释6倍)，注射后分别在2min(T1)、7min(T2)乙醚麻醉后用玻璃毛细管从小鼠眼眶静脉丛采血20μL，溶于20mL0.1％Na₂CO₃溶液中摇匀，静置20min后每个样品取100μL加入到96孔板中，取两次样分别加入不同孔中，以0.1％溶液为空白对照，使用酶标仪在680nm波长测量其OD值，将小鼠处死后取肝脏和脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，根据公式计算廓清指数K值、校正廓清指数Ka值及免疫器官指数，计算公式为