[发明专利]同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒及方法有效
| 申请号： | 201410322816.6 | 申请日： | 2014-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN104073572A | 公开（公告）日： | 2014-10-01 |
| 发明（设计）人： | 刘科宏;周常勇;李中安;周彦 | 申请（专利权）人： | 西南大学柑桔研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/94 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 谭春艳 |
| 地址： | 400712 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 同时 检测 cimv sdv 实时 荧光 rt pcr 试剂盒 方法 | ||
1.一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测试剂盒，主要包括特异性引物以及PCR反应试剂，其特征在于：所述特异性引物序列如下：
上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；
下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。
2.一种同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，所述方法包括：
(1)提取柑桔待测样品总RNA；
(2)样品总RNA经反转录获得其cDNA；
(3)以样品cDNA为模板，加入特异性引物和PCR反应试剂，进行实时荧光RT-PCR检测，根据Ct值诊断是否含有CiMV和SDV或者两种病毒中的一种；所述特异性引物核苷酸序列如下：
上游引物：5’-CCGCTTAAGAGTGGCATTAGGT-3’；
下游引物：5’-TCCTGGATCGGAAAGGGAAGAG-3’。
3.如权利要求2所述的同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，其特征在于：根据Ct值进行判断，当Ct值≤35时，样品判断为阳性，带有CiMV和SDV或者两种病毒中的一种；当Ct值>35时，样品判断为阴性，不带CiMV和SDV。
4.如权利要求2所述的同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，其特征在于：所述CiMV或SDV特异性引物实时荧光RT-PCR扩增产物大小为160bp。
5.如权利要求2所述的同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤(3)所述PCR反应体系如下：SYBR Premix Ex Taq Ⅱ12.5μL；10μM的上、下游引物各0.2μL，cDNA模板1μL，超纯水11.1μL。
6.如权利要求2所述的同时检测CiMV和SDV的实时荧光RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤(3)所述PCR反应程序为：95℃5s，60℃30s，采集荧光信号，共40个循环。
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