[发明专利]一种基于DNA酶催化作用的1-萘酚电化学测定方法

权利要求书

1.一种基于DNA酶催化作用的1-萘酚电化学测定方法，其特征在于包括以下步骤：

1)电极的预处理与活化：

将直径为1mm的金电极在鹿皮抛光布上用直径为0.05～2μm的膏状α-Al₂O₃抛光至镜面，抛光后洗去表面污物，并依次在乙醇和超纯水中超声清洗，每次2～3min，重复三次；然后在0.1～2.0mol/L H₂SO₄溶液中经循环伏安扫描至稳定，最后用超纯水冲洗干净，氮气吹干，得到表面干净的金电极；

2)G-DNA溶液的配制：

将固体G-DNA序列用5～50mM Tris-NaClO₄缓冲溶液溶解，用漩涡振荡器混匀，静置于室温下4h备用；

3)G-DNA修饰电极的制备：

将上述步骤1)活化处理的金电极浸泡在上述步骤2)配制的G-DNA溶液中，静置于室温下。巯基修饰的G-DNA通过Au-S键作用自组装于金电极表面，从而得到G-DNA酶修饰电极。

4)酶活性G-DNA修饰电极的制备：

将上述步骤3)制备的G-DNA修饰的金电极依次浸泡在Tris-NaClO₄缓冲溶液配制的KClO₄、hemin溶液中各1h，从而得到具有类过氧化物酶催化活性的G-DNA修饰电极。

2.根据权利要求1所述的一种基于DNA酶催化作用的1-萘酚电化学测定方法，其特征在于：所述Tris-NaClO₄缓冲溶液中KClO₄浓度为2～20mM，hemin浓度为1～50μM。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：所使用的G-DNA为5′端含双硫修饰的共26个碱基的单链DNA序列，共包含两部分：靠近G-DNA的5′端1～9的胸腺嘧啶碱基为柔性间隔基团及可以形成G-DNA结构的10～26碱基部分。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述G-DNA的浓度为1～10μM。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：G-DNA的部分碱基数目为17。

6.一种应用如权利要求1-4中任一项所述制备方法得到的G-DNA修饰电极对1-萘酚检测的方法，其特征在于具体步骤为：以铂丝电极为对电极，银/氯化银(饱和KCl溶液)为参比电极，以G-DNA修饰金电极为工作电极构筑三电极体系，先将G-DNA修饰电极在K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]溶液中进行电化学阻抗测量，测完后用Tris-NaClO₄缓冲溶液淋洗，然后置于缓冲溶液配制的不同浓度梯度的含过氧化氢的1-萘酚溶液中20min，然后再进行电化学阻抗测定，比较作用前后阻抗值的变化。

7.如权利要求6所述的G-DNA修饰的金电极在水中对1-萘酚的检测。