[发明专利]一种磷酸化肽的吸附富集方法、添加剂及其应用

权利要求书

1.一种磷酸化肽的吸附富集方法，包括：

(1)将非特异吸附抑制剂添加到上样缓冲液中，同时，将部分待检样品溶于上样缓冲液中，采用富集过滤柱对磷酸化肽进行吸附富集；

(2)收集富集后的样品，对其进行分析，计算20种氨基酸在非磷酸化肽中丰度，作为第一丰度，并计算非磷酸肽所在蛋白质中20种氨基酸的丰度作为第二丰度，计算所述第一丰度比第二丰度的比值，选择比值较高的至少一种氨基酸作为添加剂；

(3)将步骤(2)所述的添加剂加入到上样缓冲液中，使用加入了添加剂的上样缓冲液，再采用另外一个富集过滤柱对待检样品进行磷酸化肽富集。

2.根据权利要求1所述的吸附富集方法，其特征在于：所述富集过滤柱为固相金属氧化物过滤柱；所述金属氧化物过滤柱选自二氧化钛过滤柱、二氧化锆过滤柱和二氧化硅过滤柱中的至少一种；优选为二氧化钛过滤柱。

3.根据权利要求1所述的吸附富集方法，其特征在于：所述非特异吸附抑制剂选自谷氨酸、天冬氨酸和乙醇酸中的至少一种。

4.一种磷酸化肽的金属氧化物富集法，包括：

(1)将非特异性吸附抑制剂加入到上样缓冲液中，同时，将部分待检样品溶于上样缓冲液中，采用金属氧化物过滤柱对磷酸化肽进行富集；

(2)收集富集后的样品，对其进行分析，计算20种氨基酸在非磷酸化肽中丰度，作为第一丰度，并计算非磷酸肽所在蛋白质中20种氨基酸的丰度作为第二丰度，计算所述第一丰度比第二丰度的比值，选择比值较高的至少一种氨基酸作为添加剂；

(3)将步骤(2)所述的添加剂加入到上样缓冲液中，使用加入添加剂的上样缓冲液，采用另外一个金属氧化物过滤柱对待检样品进行磷酸化肽富集。

5.根据权利要求4所述的金属氧化物富集法，其特征在于：所述金属氧化物过滤柱选自二氧化钛过滤柱、二氧化锆过滤柱和二氧化硅过滤柱中的至少一种；优选为二氧化钛过滤柱。

6.一种磷酸化肽的二氧化钛富集法，包括：

(1)将非特异性吸附抑制剂加入到上样缓冲液中，同时，将部分待检样品溶于上样缓冲液中，采用二氧化钛过滤柱对磷酸化肽进行富集；

(2)收集富集后的样品，对其进行分析，计算20种氨基酸在非磷酸化肽中丰度，作为第一丰度，并计算非磷酸肽所在蛋白质中20种氨基酸的丰度作为第二丰度，计算所述第一丰度比第二丰度的比值，选择比值较高的至少一种氨基酸作为添加剂；

(3)将步骤(2)所述的添加剂加入到上样缓冲液中，使用加入添加剂的上样缓冲液，再采用另外一个二氧化钛过滤柱对待检样品进行磷酸化肽富集。

7.一种用于金属氧化物富集法的添加剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

(1)将非特异性吸附抑制剂添加到上样缓冲液中，同时，将部分待检样品溶于上样缓冲液中，采用金属氧化物过滤柱对磷酸化肽进行富集；

(2)收集富集后的样品，对其进行分析，计算20种氨基酸在非磷酸化肽中丰度，作为第一丰度，并计算非磷酸肽所在蛋白质中20种氨基酸的丰度作为第二丰度；

(3)计算所述第一丰度比第二丰度的比值，选择比值较高的至少一种氨基酸作为添加剂。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于：所述金属氧化物富集法为二氧化钛富集法，所述金属氧化物过滤柱为二氧化钛过滤柱。

9.一种由权利要求7或8所述的制备方法制备的添加剂。

10.一种添加有权利要求8所述的添加剂的上样缓冲液。