[发明专利]四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗

说明书

技术领域

本发明涉及生物接种疫苗，具体涉及到一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗。

背景技术

流行性脑脊髓膜炎，是由脑膜炎双球菌感染脑膜或者脑脊髓膜引起的呼吸道传染病，临床表现主要有高烧、头痛、喷射状呕吐、脖子发硬。也可引起败血症，皮肤出现紫色淤血、瘀斑，脑膜炎会引起脑部损伤而遗留听力下降或耳聋、智力低下等后遗症。病死率在5%～10%。流脑冬春季节病例高发，一般11～12月份病例开始增多，第二年的2～5月份为发病高峰期。该病是发病率高，危险性大，是严重危害儿童健康的传染病。根据荚膜多糖的化学结构，脑膜炎球菌可分为十几个血清群，其中A、B、C、Y和W135是最主要的流行菌群。接种疫苗是预防流脑的主要途径。

用脑膜炎球菌荚膜多糖制备的疫苗具有一定的预防效果，但它是一种T细胞非依赖性抗原，对2岁以下的婴幼儿免疫效果很差，而且不能诱生免疫记忆。与载体蛋白偶联可以将多糖抗原转变为T细胞依赖性抗原，不但对婴幼儿有效，而且能诱生免疫记忆。但是这种多糖蛋白结合疫苗的生产工艺比较复杂，产量较低，价格较贵，远远不能满足计划免疫的大规模需求。因此，有必要研制一种新型的脑膜炎球菌疫苗。

为了解决现有技术中的上述不足，本发明提出了一种新的解决方案。

发明内容

本发明的目的是提供一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗。

为达上述目的，本发明所采用的技术方案是：提供一种四价脑膜炎球菌多糖载体蛋白结合疫苗，包括： A群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；C群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；Y群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；W135群脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物；

免疫活性剂，该免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸；其中CpG是非甲基化的；佐剂，该佐剂包括氢氧化铝和乳糖。

本发明的一个实施方案中，提供了一种可以提高疫苗的免疫效果、降低疫苗抗原的用量、减少免疫针次和降低疫苗成本的脑膜炎球菌疫苗。

附图说明

图1为实验例1中A1疫苗和B1疫苗产生特异性抗体的抗体滴度；

图2为实验例2中A2疫苗和B2疫苗产生特异性抗体的抗体滴度；

图3为实验例1和实验例2中疫苗产生的特异性抗体的特异性；

其中，带有三角形的曲线为实验例2中B2组疫苗产生的特异性抗体的特异性曲线，带有正方形的曲线为实验例1中B1组疫苗产生的特异性抗体的特异性曲线。

具体实施方式

本发明的一个实施方案中，A群、C群、Y群和W135群脑膜炎球菌，这四种脑膜炎球菌的荚膜多糖与载体蛋白的结合是通过以下方法来实现的：

步骤1：分别将四种脑膜炎球菌多糖进行活化反应与衍化反应，在反应时，首先使用溴化氰活化脑膜炎球菌多糖，然后用乙二胺衍化溴化氰活化的脑膜炎球菌多糖，最后用试剂衍化多糖。

步骤2：载体蛋白的巯基化，所用到的巯基化试剂包括但不限于2-亚氨基硫烷。

步骤3：衍化的脑膜炎球菌多糖与巯基化的载体蛋白结合。

脑膜炎球菌加膜多糖与载体蛋白的偶联方法已经被多个文献公开，因此，该耦联方法不仅限于本发明公开的方法，采用其他偶联方法同样可以达到本发明的实施目的。

在本发明的另一个实施方案中，脑膜炎球菌荚膜多糖与载体蛋白的化学偶联物优选是脑膜炎球菌血清群A群、C群、Y群和W135群中的一种或多种荚膜多糖与破伤风类毒素或白喉类毒素或其它任何适用于人用疫苗的载体蛋白的化学偶联物。此处的破伤风类毒素或白喉类毒素均是示意性地说明本发明的，并不构成对本发明的任何限制，任何适用于人用疫苗的载体蛋白都适用于本发明

本发明的一个实施方案中，免疫活性剂为寡聚脱氧核苷酸，其序列中含有两个拷贝的5’—CGTTCGAG—3’；所述寡聚脱氧核苷酸的长度为18~38个核苷酸；其中CpG是非甲基化的。优化的，免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TCGC  CGTTCGAG  CCTA  CGTTCGAG  CTTG—3’。进一步优化的，免疫活性剂的核苷酸序列为5’—TTCTGAC  CGTTCGAG  TGCACTA  CGTTCGAG  CAGTTG—3’。在实施本方案时，可以按照现有的任一方法制备四价脑膜炎球菌加膜多糖，然后与可以接收的载体蛋白结合，结合和可以将偶联物与免疫活性剂和佐剂简单混合，制得疫苗。