[发明专利]胶质芽孢杆菌及其高密度发酵方法

权利要求书

1.胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)HSCUP-76-8高密度发酵方法，包括如下步骤：

(1)菌种活化与斜面种子培养将胶质芽孢杆菌HSCUP-76-8接种于斜面培养基进行活化，温度控制在29-33℃，培养24-48小时，得到原始斜面种子，再将原始斜面种子接种于斜面培养基，相同条件培养，得生产斜面种子备用；

(2)摇瓶培养将生产斜面种子接种于摇瓶培养基中，在200-500mL的容器中装入20％-45％的摇瓶培养基，摇床培养温度29-33℃、转速160-220r/min、培养时间8-12小时，得种子液备用；

(3)种子罐培养将种子液接种于种子罐培养基，装料系数0.7-0.8，121℃蒸汽灭菌20分钟，接种量5％-10％，培养温度29～33℃，通气量为1.0：0.8～1.0(v/v·min)，通过调节搅拌转速控制溶氧饱和度D0值10％～30％，pH控制在7.2±0.2，培养8～12小时，获得对数生长期种子液，在显微镜视野中细胞呈细长形，表现为着色力强，备用；

(4)第一阶段发酵培养将种子罐种子液接种于发酵基础培养基中，装料系数0.7-0.8，121℃蒸汽灭菌20分钟，接种量5％～10％，控制参数：温度29～33℃，pH值7.0～7.2，通气量1：0.8-1，2(v/v·min)，以搅拌转速控制溶氧饱和度DO值20％～30％，以植物油为消泡剂控制泡沫；每间隔4小时取一次样，立即作镜检观察菌数及菌体形态，化验糖、氨态氮；根据检验结果适时补料，控制糖剂量为2g/L～3g/L、以NH₄C1控制氮源0.5g/L～0.1g/L，接近对数生长末期时停止补氮，此时，在显微镜视野中出现少数短粗状细胞为特征；

(5)第二阶段发酵培养控制参数：温度33-37℃，pH值7.2～8.9，通气量为1：1.0-0.8(v/v·min)，以搅拌转速控制溶氧饱和度DO值5％～10％，加入0.1g/L碳酸钙，促进芽孢形成，每间隔4小时取样，立即作镜检观察菌体形态，当镜检视野中的菌体形态全部芽孢时即为发酵终点，停止发酵，贮存备用；

所述胶质芽孢杆菌已于2013年11月19日保于中国微生物菌种保管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNO.8481；

所述的胶质芽孢杆菌HSCUP-76-8原始菌株分离自山西省和顺钾页岩山洞岩床，将该菌株进行紫外诱变和等离子诱变处理后获得，经过革兰氏染色，芽孢染色，荚膜染色，鞭毛染色，电子显微镜观察及其他生理生化特性的测定，最后经过16SrDNA序列的比对分析，鉴定为胶质芽孢杆菌，定名Bacillus mucilaginosus HSC。

2.根据权利要求1所述胶质芽孢杆菌HSCUP-76-8高密度发酵方法，其特征在于，所述斜面培养基的组成成分为：蔗糖2～5g、NaH₂PO₄ 0.5～1g、MgSO₄·7H₂O 0.2～0.5g、FeCl₃0.005g、CaCO₃ 0-0.1g、琼脂20～30g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.4。

3.根据权利要求1所述胶质芽孢杆菌HSCUP-76-8高密度发酵方法，其特征在于，所述摇瓶培养基的组成成分为：蔗糖5～10g，NH₄Cl 0.5～1g、NaH₂PO₄ 1-1.5g、MgSO₄·7H₂O 0.5-1g、FeC1₃ 0.005g、CaCO₃ 0.1-0.3g、蒸馏水1000mL，pH7.0-7.4。