[发明专利]稳定表达人MATE1转运体的细胞模型的构建及应用

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及稳定表达人multidrug and toxin excretion protein 1(hMATE1)转运体的马丁达比狗肾上皮(Madin-Daby canine kidney cells,MDCK)细胞模型的构建，共转染人有机阳离子转运体1(human organic cation transporter 1，hOCT1)和hMATE1的MDCK细胞模型的构建，共转染人有机阳离子转运体2(human organic cation transporter 2，hOCT2)和hMATE1的MDCK细胞模型的构建以及三种细胞模型的应用。 

技术背景

随着对药物代谢研究的深入，由药物转运体介导的零相代谢和三相代谢在药物体内处置中的作用越来越受到关注。目前已发现solute carrier(SLC)超家族和ATP-binding carrier(ABC)超家族的多种转运体，如有机阳离子转运体(organic cation transporters,OCTs)、有机阴离子转运多肽(organic anion transporting polypeptides,OATPs)、有机阴离子转运体(organic anion transporters,OATs)、MATEs、P-糖蛋白(p-glycoprotein，P-gp)及乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)等在药物的体内处置过程中发挥着重要作用。其中MATEs家族的重要成员hMATE1由人SLC47A1(NM_018242.2)基因编码，主要分布在肝脏肝血窦侧肝细胞的胆毛细管一侧和肾小管上皮细胞刷状缘侧，可将多种代谢物和外源性物质外排至胆汁和尿液中[Atsushi Y.,Ken-ichi I.Importance of the multidrug and toxin extrusion MATE/SLC47A family to pharmacokinetics,pharmacodynamics/toxicodynamics and pharmacogenomics.British Jounal of Pharmacology.2011；164:1817-1825.]。hMATE1的底物范围非常广泛，涵盖生理条件下呈阳离子的化合物、两性化合物及阴离子化合物，外源性药物毒物及内源性代谢物。hMATE1的底物包括MPP⁺(1-methyl-4-phenylpyridinium)、TEA⁺(tetraethylammonium)、二甲双胍、西咪替丁、4’6-二脒基-2-苯基吲哚(4’6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)、阿昔洛韦、普鲁卡因胺、奥沙利铂、非索非那定、百草枯、肌酐及两性化合物头孢氨苄，其底物谱与hOCT1、hOCT2的底物谱有很大的重叠性。由于hOCT1主要分布在人肝脏肝血窦一侧的肝细胞的基底侧膜上，hOCT2分布在人近端肾小管上皮细胞的基底侧膜上，并且已有研究通过免疫荧光法证明hOCT2和hMATE1共同存在于同一肾小管上皮细胞中[Hideyuki M.,Ken-ichi I.Precise comparison of protein localization among OCT,OAT and MATE in human kidney.Journal of pharmaceutical sciences.2013；102:3302-3308.]，且分别位于细胞的基底侧膜和刷状缘侧膜上，可见hOCTs和hMATE1在某些药物的处置中发挥共同作用。目前，药物在转运体层面的相互作用已被认为是引起代谢性药物相互作用的重要原因之一，在药物研发阶段有必要考察与转运体的关系。而常用的许多人源细胞系，低表达或不表达转运体；原代细胞来源困难，且原代细胞上转运体的表达量 也会随体外培养时间的延长而减少。因此构建稳定表达人源性转运体的细胞模型是体外研究药物与转运体相互作用的重要工具。 

发明内容