[发明专利]响应面法优化超声-微波协同提取的山茱萸总皂苷及方法

说明书

技术领域

本发明属于总皂苷的提取技术领域，涉及响应面法优化超声-微波协同提取的山茱萸总皂苷及方法。

背景技术

山茱萸为山茱萸科山茱萸属多年生植物，其药用部位为成熟果实去核后的干燥果肉，是世界上三大名贵木本药材之一，具有补肝益肾、涩精固脱、内热消渴等功效。山茱萸果肉中含有环烯醚萜类、皂苷类、鞣质类、多糖、维生素、氨基酸和矿物质等多种有效成分。现代药理学研究表明，皂苷是山茱萸的重要生物活性成分之一，具有调节免疫、降血糖、抗心律失常及抑制细胞株增殖分裂等作用。

目前，有关山茱萸总皂苷的提取方法包括浸提法、回流法、超声法和微波法等。其中浸提法、回流法耗时且提取率低；超声法、微波法则杂质多，提取不彻底等缺点，并且由于提取条件的限定没有统一标准，对山茱萸不能充分利用，提取率低，无法满足山茱萸总皂苷工业生产的提取要求。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种提取率高，时间短，参数控制精准的，响应面法优化超声-微波协同提取的山茱萸总皂苷的及方法。

本发明是通过以下技术方案来实现：

本发明响应面法优化超声-微波协同提取山茱萸总皂苷的方法，包括以下步骤：

(1)材料处理：

将新鲜成熟的山茱萸果实在开水中浸泡数分钟后，流水冲洗冷却，剥除果核；将剩余的果肉干燥后粉碎，过40目筛，得到山茱萸药材粉末；

(2)超声-微波协同提取：

称取一定量的山茱萸药材粉末，置于反应容器中，按料液比为1:10～1:30的比例加入体积分数为70％的乙醇溶液并密封，连接好冷凝装置，在温度70℃，微波功率200～600W，超声功率240～420W的条件下提取3～12min得到提取液；提取液挥去乙醇后通过水饱和正丁醇萃取，合并萃取液后减压挥去正丁醇，经蒸馏水复溶得到总皂苷样液；

(3)大孔树脂纯化：

将总皂苷样液过HPD-300型大孔树脂，洗脱液浓缩干燥后得到粉末状的山茱萸总皂苷。

优选的，步骤(2)中，将山茱萸药材粉末与体积分数为70％的乙醇溶液按料液比为1；15～1:25混匀，于70℃提取3～9min，微波功率为300～500W，超声功率为300～420W。

优选的，所述的步骤(2)中，将山茱萸粉末与70％乙醇溶液按料液比为1︰21混匀，于70℃提取5min，微波功率为417W，超声功率为369W。

优选的，所述的料液比1:21，微波功率为417W，超声功率为369W和时间5min的提取条件由响应面法优化得到，步骤如下；

1)制备山茱萸总皂苷样品液；称取山茱萸药材粉末1g，置于反应瓶中，加入70％的乙醇溶液密封，连接好回流装置，在一定条件下提取，抽滤，挥去乙醇，水饱和正丁醇萃取，定容至20mL，得到山茱萸总皂苷样品液备用；精密称取齐墩果酸标品2.0mg，用无水乙醇制得0.2mg/mL的标准品溶液，并绘制标准曲线；按照标准曲线下的检测方法进行测定，并根据回归方程计算山茱萸总皂苷样品液中总皂苷的含量；

2)单因素实验；根据步骤1)中山茱萸总皂苷样品液的制备方法，分别按料液比、超声功率、微波功率和提取时间四个单因素设计若干组单因素实验；

3)响应面法优化；以山茱萸总皂苷提取率为响应因子，采用Design-Expert软件中的Box-Behnken原理在步骤2)中单因素实验的基础上进行响应面实验，模拟得到二次多元回归方程如下：

R1＝13.76+0.34A+0.25B+0.16C－1.22D+0.25AB+0.34AC－0.01AD+0.42BC+0.068BD+0.21CD－0.75A²－1.02B²－0.85C²－1.49D²

其中，R1为相应因子，A为料液比的影响量，B为微波功率的影响量，C为超声功率的影响量，D为时间的影响量；

4)通过Design-Expert软件对回归方程的求解，得到山茱萸总皂苷提取的最佳条件为：料液比1:21.47、微波功率417.37W、超声功率368.78W、时间4.81min；再以实际操作为约束条件，将修正得到最佳提取工艺参数为：料液比1:21、微波功率417W、超声功率369W、时间5min。

本发明响应面法优化超声-微波协同提取的山茱萸总皂苷，由以上任意一项技术方案所述的提取方法制得。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：