[发明专利]鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体涉及一种鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗及其制备方法。

背景技术

鸡新城疫又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟，具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病，OIE将其列为A类疫病。鸡新城疫(Newcastle disease，ND)是由鸡新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病，以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。该病死亡率高，对养鸡业危害严重。1926年首先发现于印度尼西亚，不久又在英国新城发现，世界各国均有流行记载。

传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease Virus，缩写为IBDV)隶属于双RNA病毒科双RNA病毒属，此病主要损害鸡体淋巴器官造成免疫抑制，从而导致多种疫苗免疫无效及对其它疾病如新城疫、球虫病等的易感性增高而引起经济损失。传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)于1957年首次发生于美国Delware州南部Gumboro地区，我国于1979年相继在广州、北京、上海发现本病，对实际养殖生产造成重大损失，IBDV疫苗研究随即展开，至今国内外已开发出弱毒、中等毒力活疫苗、灭活疫苗和基因工程疫苗，对该病防控起到一定作用。但是近年来，我国一些地方，特别是在法氏囊母源抗体高低不齐的蛋鸡和肉鸡饲养区，仍然屡有传染性法氏囊病(IBDV)的发生和流行，其原因主要为：一是超强毒株出现。IBDV在野外环境中变异能力很强，每年均有超强毒力的IBDV野毒出现，这一类毒株的毒力极有可能突破现有疫苗的保护，从而导致免疫鸡群出现感染发病、死亡的现象。二是弱毒疫苗无法突破母源抗体。现行免疫程序中IBDV弱毒苗一般在14～18日龄免疫，接种后进入鸡体内的活病毒会被母源抗体捕获、中和而失去复制活性，因而不能达到保护效果。同时雏鸡体内母源抗体由高逐渐消减，虽有一定保护力但开始有部分鸡暴露在感染威胁当中。三是传染性法氏囊灭活疫苗研究落后。目前市场上使用的灭活疫苗一类是法氏囊全病毒灭活疫苗，使用传染性法氏囊病毒株适应细胞制备，另一类是基因工程疫苗，采用大肠杆菌表达传染性法氏囊病毒VP2基因制备。这两种疫苗可以产生一定的免疫保护效果，但是，对于出现基因变异的超强毒株，会出现保护性下降的情况。因此，针对目前我国鸡传染性法氏囊病发病趋势，分离法氏囊超强毒流行毒株，筛选其中免疫原性好、且可以适应细胞繁殖的种毒制备疫苗，对于该病的预防具有极其重要的意义，是符合生产实际需求的重要产品。

目前新城疫、传染性法氏囊严重危害家禽养殖业的发展，在各种防控措施中，疫苗的免疫仍为最重要的措施。针对新城疫、传染性法氏囊，已有相应的灭活单苗及二联灭活苗，但是免疫剂量大，抗体水平低，保护率不高，给免疫鸡群带来一定的风险。因此，研制出免疫剂量小，免疫效果更好的新城疫、传染性法氏囊二联苗是一项具有重要意义的工作。

发明内容

本发明的目的在于提供鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，含有灭活的传染性法氏囊病毒NJ09株，该毒株是超强的流行毒株、免疫原性强、攻毒保护性好；该二联灭活疫苗免疫后抗体水平高，免疫攻毒保护率高，对传染性法氏囊标准强毒株及目前流行的法氏囊超强毒株攻毒保护率达到90％以上，一次免疫，免疫持效期达到5个月。

本发明的另一目的在于提供鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，该方法简单，安全、成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗，其活性成分为灭活的鸡新城疫病毒La Sota株和传染性法氏囊病毒NJ09株，所述传染性法氏囊病毒NJ09株的保藏号为CGMCC NO：7758。

本发明还提供所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗的制备方法，将鸡新城疫病毒La Sota株病毒液与传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液分别浓缩、灭活，然后混合均匀，得到混合病毒液；将所述混合病毒液与佐剂混合均匀，得到所述鸡新城疫和传染性法氏囊二联灭活疫苗。

在本发明中，将鸡新城疫病毒La Sota株接种鸡胚进行培养，收获鸡胚液作为鸡新城疫病毒La Sota株病毒液；将传染性法氏囊病毒NJ09株接种DF-1细胞或Vero细胞进行培养，得到所述传染性法氏囊病毒NJ09株病毒液。