[发明专利]一种提高楸树增殖系数的组织培养方法

权利要求书

1.一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，其包括如下步骤：

(1)无菌培养物的建立

选取当年生楸树新发嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成3～5cm长带有腋芽的茎段，将带芽茎段用洗衣粉上清液浸泡30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min；在超净工作台上，用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗2次，然后用0.1％的氯化汞处理8min，用无菌水冲洗6次，获得无菌外植体。

(2)腋芽的诱导

将获得的无菌带芽茎段接种到诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，诱导培养基为MS基本培养基，加入0.05～0.3mg/L的IBA，0.2～1.0mg/L的BA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6.0。

(3)腋芽的增殖

待外植体腋芽诱导30d后，把上述诱导的腋芽转移到增殖培养基进行扩繁增殖，增殖培养基为MS基本培养基，加入1.5～6mg/L的BA，0.1～0.3mg/L的ZT，0.2mg/L的IAA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6.0；每20d在原培养基上继代一次，继代时，将茎段基部愈伤一起继代。

(4)芽苗生根培养

选取步骤(3)中增殖的2～3cm长的芽苗转移到生根培养基中，生根培养基为1/2MS基本培养基，附加0.01～0.05mg/L的NAA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6.0。

(5)炼苗与移栽

移栽前，把增殖获得的生根苗在培养架上拧开盖子放置7d炼苗，炼苗后取出生根组培苗，洗净根上滞留的琼脂培养基后移入营养土(泥炭土∶珍珠岩＝1∶1)中培养，喷雾每天8:00～19:00隔30min喷水15s，控制环境湿度为80～90％，等小苗有新叶长出后，逐渐降低环境湿度，按常规苗圃育苗措施管理。

2.根据权利要求1所述的育苗方法，步骤(3)所述腋芽增殖培养基优选为MS基本培养基，附加1.5mg/L的BA，0.1mg/L的ZT，0.2mg/L的IAA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6.0。

3.根据权利要求1所述的育苗方法，步骤(3)所述腋芽在增殖诱导过程中，每20d在原培养基上继代一次，继代时连同茎段基部膨大生成的愈伤一起转接，继代3次后增殖效果最好。