[发明专利]绵羊产羔数性状相关的分子标记及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及绵羊分子标记制备技术领域，具体涉及一种与绵羊产羔数性状相关的分子标记及其应用，所述的分子标记从绵羊LHβ基因中克隆得到，它包括绵羊LHβ基因全基因组序列突变位点的检测方法与应用。

背景技术

绵羊繁殖性状是重要的经济性状，而产羔数又是主要的繁殖性状之一。研究表明，绵羊繁殖性状属于低遗传力的阈性状，动物的产仔(羔)数是影响生产效益的一个重要因素，它受到基因控制，而且为加性-显性基因作用模式(储明星等.主基因及其在动物育种中的应用[J].农业生物技术学报,1995,3(4)：23-31.)。本发明所选目标性状为产羔数，具有较容易度量的特点，为大样本含量的试验群体产羔记录的采集提供了可行性。

随着分子生物学技术的发展，越来越多的与绵羊产羔数性状相关的候选基因和分子标记被发现，为标记辅助选择(marker-assisted selection，MAS)在育种中的应用积累了丰富的基因素材。目前，标记辅助选择已作为常规选择法的辅助手段而被广泛应用，大大提高了产羔数性状的改良速度。标记辅助选择包括随机引物扩增多态性(RAPD)标记、微卫星标记、PCR-RFLP标记、分子标记与QTL位点的连锁分析方法等(赵西彪，AREG,ESR和FSHβ亚基基因与猪产仔数关系研究.扬州大学；2008.)。其中PCR-RFLP因具有检测不受发育阶段、性别等外部条件的影响的优点，所标记的变异数目不受限制，实用可靠而得到广泛的应用。

促黄体素是腺垂体嗜碱性颗粒细胞分泌的糖蛋白质激素，通过血液循环到达性腺等靶器官发挥作用。促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、促甲状腺素(TSH)和促性腺素(CG)4种糖蛋白激素均由α和β2个亚基共轭结合而组成，在同一种内甚至是所有哺乳动物中，α亚基为它们共有，而β亚基具有物种和激素的特异性(PIERCE J G,PARSONS T F.Glycoprotein hormones:structure and function[J].Annu.Rev.Biochem.1981,50:465-495.)，因此，对糖蛋白激素的研究重点在于β亚基。LHβ可以在排卵前选择性诱导卵泡生长发育同时诱发排卵；促进黄体形成、分泌孕酮；刺激卵泡膜细胞分泌雄激素，扩散到卵泡液中被颗粒细胞摄取而芳构化为雌激素(杨利国.动物繁殖学[M].中国农业出版社.2005:3-7.)。LHβ发挥作用必须依赖其受体，LHβ或LHR基因发生突变，可能会导致LHβ表达量降低、与受体结合的活性部位发生失活或部分失活，或导致LHR降低或丧失受体功能，这些均会导致G蛋白偶联及信号传递发生障碍，进而对家畜的繁殖性能产生影响(张雪琴等.LH/CG受体研究进展[J].草业与畜牧.2008,4:1-9.)。师庆伟等(师庆伟等.促黄体素(LH)β亚基基因的单核苷酸多态性及其与猪繁殖性状的相关性[J].江苏农业科学.2006,6:302-304.)在检测民猪LHβ基因多态性时，发现第二外显子SNP位点(T1757C)与母猪的产仔数(P<0.01)、初生窝重(P<0.01)及初生活仔窝重显著相关(P<0.05)。刘源(刘源.绵羊高繁殖力候选基因LHβ和GnRHR的研究[D].南京:南京农业大学.2009.)在绵羊LHβ基因上检测到6个多态位点(T286C、A424G、T439C、G705A、C1042G、C1136T)，其中T286C、C1042G、C1136T与绵羊产羔数显著相关(P<0.05)，并且T286C还与绵羊的初生重相关(P<0.05)。黄勤华等(黄勤华等.贵州黑山羊促黄体素β基因多态性及其与产羔数的关系[J].贵州农业科学.2010,38(6):162-164.)报道在山羊群体中也存在与产羔数相关的多态位点。Yang等(Yang W C,Tang K Q,Li S J,et al.Polymorphisms of the bovine luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor(LHCGR)gene and its association with superovulation traits[J].Molecular Biology Reports.2012,39(3):2481-2487.)在奶牛LHR基因上检测到4个SNPs(G51656T、A51703G、A51726G、G51737A)，其中G51656T与经过超数排卵处理后的排卵数显著相关((P<0.05)，A51703G与超数排卵处理后的排卵数显著相关(P<0.01)，可移植胚胎数显著相关(P<0.01)。