[发明专利]一种复方阿胶浆口服液的质量检测方法

权利要求书

1.一种复方阿胶浆口服液的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)乙腈沉淀蛋白预处理：用移液管准确移取1-10mL复方阿胶浆口服液样品于离心管中，加入80％甲醇-水40-200μL和内标溶液20-100μL，振荡均匀；加体积为样品体积2-5倍的乙腈，振荡器混匀5-30min，静置，离心；移取上清液0.2-2mL，离心浓缩后加入30％甲醇-水0.2-2mL复溶；离心取上清液进样5μL分析；

(2)高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测：梯度洗脱：进样量5μL，分析时间70分钟，色谱条件为：色谱柱：反相C18柱，流动相：A相0.01-0.1％甲酸-水，B相0.01-0.1％甲酸-乙腈，流速为0.20-0.80mL/min；然后进入质谱仪检测。

2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述内标溶液为柚皮苷和地高辛溶液；其中，柚皮苷溶液的浓度范围为0.02-0.5mg/mL；地高辛溶液的浓度范围为0.02-0.2mg/mL；优选0.2mg/mL的柚皮苷溶液和0.05mg/mL的地高辛溶液。

3.如权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述乙腈的用量为样品体积的3倍。

4.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述静置是在4℃冰箱静置10-24h；所述离心的条件如下：4℃，2500rpm，10-30min。

5.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(1)中，步骤(1)如下进行：用移液管准确移取2mL复方阿胶浆口服液样品于15mL离心管中，加入80％甲醇-水80μL和柚皮苷和地高辛内标溶液各40μL，振荡均匀；加乙腈6mL，振荡器混匀10min，于4℃冰箱静置12h；4℃，2500rpm离心20min；移取上清液0.5mL，离心浓缩后加入30％甲醇-水1mL复溶；离心取上清液进样5μL分析。

6.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，流动相的流速为0.50mL/min。

7.如权利要求1-6任一所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，线性梯度洗脱程序为：0分钟流动相A:B的比例为85:15；20分钟流动相A:B的比例为75:25；35分钟流动相A:B的比例为68:32；45分钟流动相A:B的比例为65:35；70分钟流动相A:B的比例22:78。

8.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，采用A、B两相分别为浓度0.02％甲酸的水溶液和0.02％甲酸的乙腈作为流动相的组成。

9.如权利要求1或8所述的质量检测方法，其特征在于，采用的高效液相色谱仪为Agilent1200高效液相色谱仪，配有四元泵，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)；采用的质谱仪为API4000三重四级杆质谱仪(美国AB公司)，配有Analyst工作站；所述的质谱仪检测如下进行：碰撞气为超纯氦，鞘气和辅助气为高纯氮；电喷雾电离，检测模式为负离子模式；气帘气：30psi；雾化气：50psi；加热气：55psi；加热器温度：550℃；电压：-4000V；界面加热器：On；使用选择离子模式。

10.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)乙腈沉淀蛋白预处理：用移液管准确移取2mL复方阿胶浆口服液样品于15mL离心管中，加入80％甲醇-水80μL和0.2mg/mL的柚皮苷溶液和0.05mg/mL的地高辛溶液各40μL，振荡均匀；加乙腈6mL，振荡器混匀10min，于4℃冰箱静置12h；4℃，2500rpm离心20min；移取上清液0.5mL，离心浓缩后加入30％甲醇-水1mL复溶；离心取上清液进样5μL分析；

(2)高效液相色谱-串联三重四级杆质谱检测：

①液相条件Agilent1200高效液相色谱仪，配有四元泵，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)，进样量5μL，分析时间70分钟，色谱条件为：流动相：A相0.02％甲酸-水，B相0.02％甲酸-乙腈，梯度洗脱，流速为0.50mL/min，柱温：30℃；其中线性梯度洗脱程序为：0分钟流动相A:B的比例为85:15；20分钟流动相A:B的比例为75:25；35分钟流动相A:B的比例为68:32；45分钟流动相A:B的比例为65:35；70分钟流动相A:B的比例22:78；

②质谱条件API4000三重四级杆质谱仪(美国AB公司)，配有Analyst工作站；碰撞气为超纯氦，鞘气和辅助气为高纯氮；电喷雾电离(ESI)，检测模式为负离子模式；气帘气(Curtain Gas)：30psi；雾化气(Nebulizer Gas1)：50psi；加热气(Heater Gas2)：55psi；加热器温度(Temp)：550℃；电压(IonSpray)：-4000V；界面加热器(ihe)：On；使用选择离子模式(MRM)。