[发明专利]一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法

说明书

技术领域

本发明属生物医学领域，具体涉及一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法。

背景技术

目前，随着对肺疾病和呼吸功能的了解愈发深入，鼻腔给药的应用范围逐渐扩大，各类吸入制剂作为行之有效的治疗手段也越来越受重视。定量吸入气雾剂因具有靶向和局部给药的特点，已成为哮喘和慢性阻塞性肺病最有效的维持治疗方式。而哮喘本身对呼吸道过敏及其敏感，判断吸入药物是否对患者具有过敏性非常重要。

通常采用低剂量卵白蛋白(OVA)构建豚鼠过敏性哮喘模型，致敏阶段：哮喘模型组在腹腔注射3mg/mL卵白蛋白生理盐水加氢氧化铝(粉剂)作为免疫佐剂致敏，分3次反复致敏；末次致敏后14天通过静脉注射卵白蛋白，激发后即刻起至少观察30分钟，观察豚鼠过敏征状。该方法可出现过敏反应征状，但无法模拟鼻部吸入给药时，靶器官为呼吸道的过敏性哮喘，具有局限性。

发明内容

本发明针对目前缺乏豚鼠气道过敏性哮喘模型这一临床上常见疾病的疾病动物模型的现状，提供用于一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案之一为：一种豚鼠气道过敏性哮喘模型的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次，共注射2～4次使豚鼠致敏；

(2)在步骤(1)末次致敏后第12～15天，使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液，从而激发气道过敏性哮喘，即得。

其中步骤(1)所述的注射为本领域常规的注射方法，较佳地为腹腔注射。其中所述卵白蛋白生理盐水溶液的浓度较佳地为2～5mg/ml，优选地为3mg/ml。

其中步骤(1)所述的卵白蛋白生理盐水溶液的注射的剂量较佳地为2～5ml/kg，优选地为3ml/kg。

其中步骤(1)所述向豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液，隔日注射一次的方法较佳地为：在豚鼠腹腔注射卵白蛋白生理盐水溶液的第一天，第三天和第五天，共注射三次卵白蛋白生理盐水溶液。

其中步骤(2)所述的雾化的卵白蛋白生理盐水溶液浓度较佳地为4～7mg/ml，优选地为5mg/ml。

其中步骤(2)所述的雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的流速较佳地为2.0～3.0升/分，优选地为2.5升/分。

其中步骤(2)所述使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的方法为本领域常规方法，较佳地是利用IN-TOX小动物鼻式暴露系统使豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液。

其中步骤(2)所述的豚鼠经由口鼻吸入雾化的卵白蛋白生理盐水溶液的时间较佳地为15～25分钟，优选地为20分钟。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发

明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：与现有方法比，本方法模拟雾化吸入给药，模拟鼻腔给药的吸入制剂，靶器官唯一，针对性强，选择性强、重复性好。而且普通豚鼠静脉注射激发过敏试验无法预测呼吸道吸入药物是否引起过敏。实验证明致敏效果良好，以仅经鼻雾化吸入OVA为途径进行致敏激发，成功地诱发了气道过敏性哮喘，成功建立了豚鼠气道过敏性哮喘模型。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1制备豚鼠气道过敏性哮喘模型

实验动物：采用豚鼠12只，雌雄各半。Hartley-Dunkin，SPF级，体重300～360g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

实验用卵白蛋白(OVA)购买自SIGMA公司。

饲养环境为：温度：20～26℃；湿度：40％～70％；换气次数：每小时换气次数不小于15次，使用100％的全新风(无空气循环)。光照：自动光照，每12小时明暗交替，7:00PM关灯，次日7:00AM开灯。

豚鼠气道过敏性哮喘模型制备方法主要分为致敏期和激发期两个阶段。

致敏期为：豚鼠腹腔注射3mg/ml OVA生理盐水溶液3ml/kg致敏，隔日注射1次，给药时间为D1、D3和D5天，共给药3次。