[发明专利]一种猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，

由一套引物、10倍环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照、阴性对照和显色剂组成；所述的一套引物是由一对引物和一对内引物组成，其序列为：

引物1：TCCGGATCTACCTCGACG

引物2：CCTCCTCGCTCAGGCT

内引物1：TCGGCTCGGGCACGTACAGCTACGGCACCGGCAAGA

内引物2：CGTACTGGCGCACTCTGTTCGGTTCTGCTTCCGGGTCTGC

其中，所述的一对引物与一对内引物的摩尔数之比为1：6～9；所述的DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活力为8个活性单位/微升；所述的阳性对照为含有插入猪伪狂犬病一段特异序列的阳性质粒，环介导等温扩增反应扩增区位于该特异序列中，其浓度为10⁷拷贝/μL；所述的阴性对照为灭菌双蒸水；所述的显色剂为20倍SYBR Green I。

2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，所述的10倍环介导等温扩增反应液是由200mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、40～100mM硫酸镁、4～10M甜菜碱、5～18mM的dNTPs、和质量百分浓度0.1％的Triton X-100组成。

3.根据权利要求2所述的猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，所述的dNTPs为含有四种dNTP的等量混合物。

4.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，所述的阳性质粒的制作方法为：采用PCR扩增一段猪伪狂犬病TK基因特异序列，然后装入PMD18-T载体，转化至DH5α感受态细菌，抽取质粒DNA经序列确定后，采用紫外分光光度计测定质粒DNA的浓度并用灭菌双蒸水调整拷贝数至10⁷拷贝/μL。

5.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病等温PCR现场快速检测试剂盒，其特征在于，所述的SYBR Green I为高灵敏度的DNA荧光染料。